刘双全 刘琼

梅毒螺旋体Tp0844重组蛋白的表达、纯化及免疫反应性研究

刘双全 刘琼

目的 克隆、表达梅毒螺旋体重组蛋白Tp0844，纯化表达产物并进行免疫反应性分析，筛选与宿主具有高反应性的Tp主要蛋白。方法 通过生物信息学分析，获取Tp0844基因序列，构建原核载体进行诱导表达；Ni-NTA亲合层析柱纯化重组蛋白，Western印迹法检测其重组蛋白与梅毒阴阳性血清的反应情况。结果 成功构建PET-30a（+）-Tp0844原核表达重组体，经诱导表达后发现该重组体可高表达出可溶性的重组蛋白，经亲和层析纯化后获得了相对分子质量为43 000的重组蛋白；以梅毒IgG抗体阴、阳性血清为一抗，采用Western印迹法检测发现，Tp0844重组蛋白与梅毒阳性血清能发生明显特异反应，而与健康阴性血清未出现反应条带。结论 可溶性重组表达的Tp0844蛋白具有较好的免疫反应性，可作为梅毒发病机制研究的候选抗原。

苍白密螺旋体；重组蛋白质类；TP0844；免疫学；免疫反应性

梅毒是由梅毒螺旋体（Treponema Pallidun，Tp）感染引起的危害人类健康的性传播疾病［1］。其不仅可严重损害人体的多个器官，还可由母体经胎盘垂直传播给胎儿，引起早产、流产、死胎和畸胎或胎传梅毒，严重影响出生人口质量［2］。如何有效控制和预防梅毒，已成为普遍关注的公共卫生问题，而进行梅毒早期诊断方法研究以及阐明Tp的发病机制是控制本病的关键环节。由于Tp不能体外连续人工培养，对于其发病机制研究进展缓慢。近年来，基因序列分析发现，Tp缺乏明显的毒力因子编码基因，包括革兰阴性细菌常见的内毒素（脂多糖）、Ⅲ型分泌系统、热休克蛋白等细胞毒因子的编码基因［2-5］。……