郑跃 陈海燕 许庆芳 叶聪秀 刘惠娴 易金玲 赖维

组织蛋白酶D绿色荧光蛋白复合质粒转染技术在慢性光损伤成纤维细胞研究中的作用

郑跃 陈海燕 许庆芳 叶聪秀 刘惠娴 易金玲 赖维

目的探讨组织蛋白酶D绿色荧光蛋白复合质粒（GFP-CatD）技术在成纤维细胞慢性光损伤研究中的作用。方法长波紫外线（UVA）25 J/cm2每天照射人皮肤成纤维细胞1次，共21 d，构建慢性光损伤成纤维细胞模型。构建GFP-CatD质粒，将其转染入慢性光损伤成纤维细胞，荧光显微镜观察绿色荧光标记的组织蛋白酶D表达，Western印迹检测组织蛋白酶D表达，流式细胞仪检测转染GFP-CatD后的慢性光损伤成纤维细胞凋亡率，噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖率。结果慢性光损伤成纤维细胞转染GFP-CatD质粒96 h，可见绿色荧光蛋白组织蛋白酶D在慢性光损伤细胞胞质内表达。Western印迹结果显示，慢性光损伤成纤维细胞转染GFP-CatD质粒后，组织蛋白酶D蛋白表达为未转染细胞的1.28倍。细胞凋亡检测结果发现，转染后的光老化成纤维细胞凋亡细胞率为4.29%±1.30%，与无转染的空白对照组凋亡细胞率3.03%±1.70%比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。MTT细胞增殖检测结果发现，转染后的光老化成纤维细胞的细胞增殖率为45.20%±4.70%，无转染质粒的光老化成纤维细胞为43.60%±3.90%（P＞0.05）。结论GFP-CatD复合质粒转染慢性光损伤成纤维细胞可示踪到组织蛋白酶D荧光蛋白，且不影响慢性光损伤成纤维细胞原有的正常生物活性和周期。

组织蛋白酶D；成纤维细胞；质粒；细胞衰老；皮肤衰老；紫外线

近年来研究发现，除了基质金属蛋白酶（MMP）家族外，溶菌酶、胶原酶、组织蛋白酶（cathepsin）等多种酶类均参与皮肤光老化发生［1-5］。……