杨葵华，边清泉，吕瑞，秦晓柳

（绵阳师范学院化学与化学工程学院，四川绵阳621000）

人参果中氨基酸含量的测定

杨葵华，边清泉，吕瑞，秦晓柳

（绵阳师范学院化学与化学工程学院，四川绵阳621000）

采用单因素试验对提取条件进行选择，氨基酸与茚三酮显色后，用分光光度法测定人参果中氨基酸含量。检测波长为565 nm，料液比为1∶15，乙醇浓度为70%，水浴回流4 h，回流两次；标准曲线方程A=0.035 2C-0.006 5，r= 0.999 3，氨基酸含量在2 mg/mL～12 mg/mL范围内线性关系良好。平均回收率为99.5%，RSD为2.9%。

人参果；氨基酸；分光光度法；测定

氨基酸（Amino acid）是构成蛋白质（protein）的基本单位，赋予蛋白质特定的分子结构形态，使它的分子具有生化活性。而蛋白质是人体的主要“建筑材料”，是生命得以延续的主要物质基础。药理研究表明单体成分在保肝［1］、增强免疫功能［2］、抗氧化［3］等方面作用很明显。人参果亦称蕨麻［4-6］富含大量蛋白质、氨基酸、维生素等营养成分，药用保健价值颇高，开发利用潜力巨大。目前少有对人参果中氨基酸含量测定的研究报告，因此本文采用紫外分光光度法［7］对人参果中氨基酸含量进行测定，对该水果的质量评价具有一定的意义。

1材料与方法

1.1试剂与仪器

T6新世纪紫外分光光度仪：南京华璧科学仪器有限公司；比色皿、比色管、容量瓶、人参果：阿坝藏族羌族自治州壤塘县农资公司；实验用水为蒸馏水和二次蒸馏水。

2%茚三酮溶液：称量茚三酮粉末1.000 0 g，加70%的乙醇使之溶解成50 mL，冷藏备用。

磷酸盐缓冲液（pH=6.8）：精密称取磷酸二氢钾1.701 1 g、氢氧化钠0.236 0 g混合加蒸馏水使其溶解，用二次蒸馏水定容至250 mL。

0.1mg/mL酪氨酸对照品溶液：精密称取酪氨酸0.010 0 g，加0.02 mol/L的氢氧化钠溶液10.0 mL，溶解完全后用二次蒸馏水定容至100 mL。

1.2样品预处理

用蒸馏水除去样品表面附着的杂质及金属离子，烘干、粉碎，装于试剂瓶备用。

取待测样品2 g加入定体积、定浓度的乙醇，回流一定时间并回流两次，合并滤液，浓缩回收乙醇，浸膏用蒸馏水加热溶解，定容至50 mL待测。

2结果与讨论

2.1波长的选择

取酪氨酸对照品溶液1.00 mL于50 mL容量瓶中，加茚三酮溶液1.00 mL和磷酸盐缓冲液1.00 mL，摇匀，水浴加热15 min，取出，冷却，用蒸馏水定容至50 mL。在紫外可见分光光度计中进行波长扫描，结果显示对照品溶液在565 nm处有最大吸收。因此，实验的最佳测定波长为565 nm。

2.2显色时间的选择

取2 mL酪氨酸对照品液于容量瓶中，按照试验方法，在其他条件不变的情况下，以6 min为起点，以3 min为梯度，改变在沸腾水浴锅中的加热时间，测定其吸光度，测定结果显色时间为15 min吸收波长最长。

2.3乙醇浓度的选择

精密称取样品6份，每份2.0000g，分别加入50%、60%、70%、80%、90%、100%乙醇30 mL，回流提取2次，每次2 h，显色定容后测吸光度A，并计算游离氨基酸的含量，结果表明用70%乙醇提取，氨基酸的含量最高。因此，选用70%的乙醇作为提取溶剂。

2.4料液比的选择

精密称取样品5份，每份2.000 0 g，按料液比分别为1∶10、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30，分别加入70%的乙醇进行回流提取，按实验方案显色定容后测吸光度A，并计算总氨基酸的含量，结果显示料液比为1∶15时提取效率最高。因此，选取料液比为1∶15。

2.5回流时间的选择

精密称取样品4份，回流提取时间分别为2、3、4、5 h，按实验方案显色后，定容测吸光度A，并计算样品中氨基酸的含量，结果表明回流4 h氨基酸含量最高。

2.6缓冲溶液用量的选择

按照试验方法，在其他条件不变的情况下，以0.5 mL为梯度，改变磷酸盐缓冲溶液的用量，测定其吸光度。结果表明用量在1.00 mL时吸光度最大，因此选取磷酸盐缓冲溶液的用量为1.00 mL。

2.7茚三酮溶液用量的选择

按照试验方法，在其他条件不变的情况下，以0.5 mL为梯度，改变茚三酮溶液的用量，测定其吸光度，结果表明用量在1.00 mL时吸光度最大，因此茚三酮溶液的用量为1.00 mL。

2.8精密度实验

精确量取样品溶液1.00 mL，按实验方案在565 nm处连续测定7次，吸光度值分别为0.489、0.491、0.492、0.492、0.491、0.491，0.490，RSD=0.2%，结果表明实验精密度良好。

2.9稳定性实验

精确量取样品溶液1.00 mL，按实验方案在565 nm处每隔10分钟测一次吸光度值，连续测定7次，吸光度值分别为0.491、0.491、0.492、0.490、0.491、0.489、0.491，RSD=0.2%。结果表明样品溶液在1 h内比较稳定。

2.10回收率实验

采用标准加入法测定氨基酸的回收率。结果见表1，平均回收率为99.5%，RSD=2.9%，表明该方法准确可靠。

表1　加标回收率（n=6）Table 1The recovery of standard addition

2.11样品液对实验结果的影响

由于样品液本身具有一定的颜色，在进行紫外测定时空白液里也需要加入相同体积的样品液，提高测定的准确度。

2.12氨基酸标准曲线

精取0.10 mg/mL酪氨酸对照液0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00 mL，各加2%茚三酮溶液1.00 mL，缓冲液1.00 mL，水浴加热15 min，取出，冷却，用蒸馏水定容至50 mL在565 nm处测吸光度。以酪氨酸浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线，见图1。

图1　氨基酸标准曲线图Fig.1The standard curve of amino acid

曲线的线性回归方程：A=0.035 2C-0.006 5相关系数R=0.999 3。氨基酸含量在2 mg/mL～12 mg/mL范围内线性关系良好。

2.13测定结果

取待测样品粉末3份，各2.000 0 g，加入70%乙醇30 mL后，回流提取2次，回流4 h，合并滤液，浓缩回收乙醇，浸膏用蒸馏水加热溶解，定容至50 mL，制备成编号为1、2、3号样品液。分别取1.00 mL，加入1.00 mL pH=6.8的磷酸盐缓冲液、1.00 mL的显色液，摇匀后放在沸水浴中加热15 min。取出快速冷却后，加水定容至50 mL，放置10 min。在565 nm处，以试剂空白溶液作参比，测定吸光度（A）。测定结果按参考公式［8］计算，结果见表2。

表2　样品测定结果Table 2Determination results of samples

人参果中氨基酸的平均含量为10.45 mg/g，RSD= 0.8%。实验证明人参果中含有丰富的氨基酸，用紫外分光光度法测定人参果中氨基酸的含量，此方法简便、快捷，回收率好。

3结论

人参果中富含大量蛋白质、氨基酸、维生素等营养成分，本文采用紫外分光光度法测定人参果中游离氨基酸的含量，方法简便、快捷，准确。药理研究表明单体成分在保肝、增强免疫功能、抗氧化等方面作用很明显，保健价值颇高，对其开发利用潜力巨大。

［1］闵光宁，鹿琼，闵光涛，等.蕨麻多糖的提取及对急性肝损伤的保护作用［J］.兰州大学学报（医学版），2008，34（2）：5-7

［2］陈炅然，胡庭俊，程富胜，等.蕨麻多糖的免疫药理实验研究［J］.兽药与饲料添加剂，2005，10（5）：1-2

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［5］李栋元，毛东风，杨具田，等.蕨麻营养成分测定与分析［J］.中兽医医药杂志，2007（3）：43-44

［6］褚良，王立波，张哲，等.藏药蕨麻的化学成分研究［J］.中国现代中药，2008，10（3）：10-12

［7］范婉萍，吴婕.用分光光度法测定含氨基酸类制品中的氨基酸含量［J］.中国测试技术，2007，33（3）：117-119

［8］杨永寿，肖培云，刘光明.蜚蠊药材质量控制方法研究［J］.时珍国医国药，2008，19（8）：1808-1809

Determination of the Amino Acids in the Ginseng

YANG Kui-hua，BIAN Qing-quan，LÜ Rui，QIN Xiao-liu
（Mianyang Normal University department of Chemistry and Chemical Engineering，Mianyang 621000，Sichuan，China）

To determine the amino acids in the ginseng.Single factor test was employed to optimize the extracting condition of the amino acids，afterward，the amino acids were determined by UV after colored with ninhydrin.The optimal extracting method was：70%alcohol was employed as the extracting agent，with the solid-liquid ratio of 1∶15，the amino acids was extracted for twice of 4 hours，and then the content was detected by UV at 565 nm.It shows that the standard curve equation was A=0.035 2C-0.006 5 with the correlation coefficient of 0.999 3，which explained the amino acids had an good liner relationship between 2 μg/mL-12 μg/mL at the detection wavelength of 565 nm.The recovery was 99.5%with the RSD of 2.9%，which implied a high reliability，precision and accuracy of this method.

Ginseng；amino acids；spectrophotometry；content

10.3969/j.issn.1005-6521.2015.11.030

2013-12-05

四川省教育厅自然科学基金项目（12ZA081）

杨葵华（1963—），女（汉），副教授，本科，主要从事食品化学的教学与研究。