刘克海 吕慧 骆蔚燕 董伶 刘克武

摘要 [目的]建立测定接骨木籽油中维生素E 含量的方法。[方法]采用反相高效液相色谱法，色谱柱为Kromasil C18柱，流动相为甲醇-水（98∶2），流速为1.0 ml/min，检测波长280 nm，柱温25 ℃。[结果]在上述条件下，维生素E在5～100 μg/ml范围内呈良好的线性关系，平均回收率为99.29%，RSD=1.44% （n=5）。[结论]该方法操作简便快捷、结果可靠、重复性好，适用于接骨木籽油中维生素E含量的测定。

关键词 接骨木籽油;维生素E;反相高效液相色谱法;含量

中图分类号 S567  文献标识码

A  文章编号 0517-6611（2015）03-055-02

Determination of the Vitamin E in Sambucus Williamsii Seed Oil by Reversed-phase High-performance Liquid Chromatography

LIU Kehai¹，LV Hui¹，LUO Weiyan¹，LIU Kewu2* et al

（1.College of Food Science and Technology，Shanghai Ocean University，Shanghai 201306;2.Heilongjiang Forest ByProduct and Speciality Research Institute，Heilongjiang Provincial Key Laboratory of Nonwood Forest Product Development，Mudanjiang，Heilongjiang 157011）

Abstract   [Objective] The research aimed to establish a method to determine the vitamin E in Sambucus Williamsii seed oil.[Method] Reversedphase highperformance liquid chromatography with Kromasil C18 column was used.Mobile phase was methanol and water （98：2，v/v） with a flow rate of 1.0 ml/min.UV detection wavelength was 280 nm and the temperature of the column was 25 ℃.[Result] There was a good linear relationship between 5-100 μg/ml of the vitamin E，the average recovery rate was 99.28% with the RSD of 1.44%.[Conclusion] This method was simple and quick，reliable with good reproduction，and suitable for the determination of the content of vitamin E in Sambucus williamsii seed oil.

Key words   Sambucus Williamsii seed oil; Vitamin E; Reversedphase highperformance liquid chromatography; Content

基金項目 上海市科委工程中心建设项目（11DZ2280300）;黑龙江省森林工业总局攻关项目（sgzjY201402）。

作者简介 刘克海（1977- ），山东日照人，副教授，在读博士，从事海洋生物资源利用研究。*通讯作者，副研究员，从事新资源食品研究。

收稿日期 20141211

接骨木生长在我国的东北地区，是一种乡土树种，它几乎遍及黑、吉、辽等北方各个地区。接骨木为忍冬科接骨木属植物^[1]，属落叶灌木，资源丰富，约有20余种，我国产有5～6种^[2]，主要分布于我国东北、华北及朝鲜、俄罗斯部分地区的丘陵地带。接骨木适应性强，易于种植，为珍稀的野生木本油料植物。据文献记载，接骨木性味甘、苦、平，无毒，具有接骨续筋、祛风利湿、活血止痛之功效^[3]，同时还具有抗炎、镇痛活性、抗骨质疏松活性、抗氧化作用、抗糖尿病作用以及促进骨折愈合作用等^[2]，药用历史悠久，药用价值广泛。

接骨木籽的含油量很高，达35%～44%^[2]，其中具有抗血脂作用的ɑ亚麻酸含量较高^[4]。从接骨木籽提取的接骨木籽油，是一种呈橙黄色、澄清透明的油状液体，具有浓郁香味，无异味。维生素E是该油中的天然抗氧化剂，其含量越高，接骨木籽油就越稳定。

维生素E，又名生育酚，是脂溶性的维生素，对人体具有重要的生理功能。维生素E不但可以维持人体的肌肉和生殖系统正常代谢，还可以维持中枢神经和血管系统的完整。此外，它还具有清除自由基的作用，可作为抗氧化剂使用^[5-6]。维生素E是广泛存在于各类植物油脂中的，且其对机体有着重要的生理功效，所以分析接骨木籽油中维生素E的含量是很必要的，同时这也是衡量该油脂营养价值的一个参考标准。关于测定维生素E的方法主要有薄层层析法、气相色谱法、比色法^[7]和高效液相色谱法，前3种方法均存在着处理样品繁琐、准确性差、灵敏度低、精密度低等缺点;而高效液相色谱法则弥补了上述方法的某些缺点，具有快速、准确、高灵敏度和高精密度等优点。目前，已有学者对接骨木籽油的理化常数、重金属含量以及脂肪酸的组成进行了研究，并做了相应的含量测定，但还没有文献报道关于测定接骨木籽油中维生素E的含量。

因此，笔者首先采用超临界二氧化碳萃取接骨木籽油，然后采用反相高效液相色谱法，以甲醇—水为流动相，采用外标法进行接骨木籽油中维生素E的含量测定，为其开发利用提供科学的依据。

1 材料与方法

1.1 仪器

日立 L2000高效液相色谱仪（日本），日立L2400紫外检测器，日立L2130高通量泵;Kromasil C18柱（250×4.6 mm）;RE52C旋转蒸发器（上海青浦沪西仪器厂）;Speed SFE2 超临界二氧化碳萃取装置（美国Applied Separations 公司）。

1.2 试剂 接骨木籽;维生素E标准品（美国Sigma公司）;甲醇为色谱纯;正己烷、乙醚均为分析纯;水为超纯水，流动相经0.45 μm微孔滤膜减压过滤。

1.3 超临界二氧化碳萃取接骨木籽油

称取10 g粉碎后的接骨木籽置于超临界装置的萃取釜里，然后在萃取压力为40 Mpa、萃取温度为40 ℃的条件下静态萃取15 min后，再动态萃取3.5 h，得到接骨木籽油^[8-9]。

1.4 色谱条件

日本日立高效液相色谱仪（L2000）;色谱柱是以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的Kromasil C18柱（直径4.6 mm，高250 mm）;赛多利斯十万分之一电子天平CPA225D;流动相为甲醇—水（98∶2）;流速为1.5 ml/min;检测波长280 nm;柱温25 ℃，进样量10 μl。

1.5 标准曲线的绘制

精密称取维生素E标准品适量，加正己烷制成每1 ml含维生素E标品1 mg的溶液，即得维生素E标准品的标准溶液;然后分别取维生素E标准溶液50、100、250、750、1 000 μl，用正己烷稀释定容至10 ml的棕色容量瓶内，制得5、10、25、75、100 μg/ml的维生素E标准溶液系列。在上述的色谱条件下进样测定，记录对应的维生素E的峰面积;最后以不同浓度的维生素E标准溶液的峰面积和对应的浓度作图，绘制标准曲线。

1.6 精密度试验 精密吸取维生素E标准溶液，重复进样5次，求得维生素E标准品的峰面积的RSD。

1.7 重复性试验

取同一批接骨木油样品5份，按样品测试条件进样测定，求得维生素E含量的RSD。

1.8 样品测定

超临界CO₂萃取制得接骨木籽油，在避光条件下，取油样约2 g，精密称定，置50 ml分液漏斗中，用乙醚提取3次，每次10 ml，然后合并乙醚液，置于水浴上蒸干乙醚，残渣用正己烷溶解，移至10 ml棕色容量瓶中，再用正己烷定容至刻度并摇匀。进样前，将溶液经0.45 μm微孔滤膜过滤后再进样。以上述色谱条件测定样品溶液和标准品溶液，用外标峰面积法计算接骨木籽油中维生素E的含量^[10]。

1.9 加样回收率试验

精密称取已知维生素E含量的接骨木籽油，约1.0 g，共取5份，分别精密加入标准品溶液（25 μg/ml）10 ml，置于20 ml棕色容量瓶中，加正己烷溶解至刻度，摇匀，然后精确移取2 ml溶液至10 ml的棕色容量瓶中，加正己烷定容刻度，密塞，摇匀，用0.45 μm的微孔滤膜过滤后进样，分别在上述色谱条件测定维生素E的含量，计算回收率，回收率的计算公式为回收率=[（加标样品的测定值-样品测定值）/加标溶液的理论值]×100%。

2 结果与分析

2.1 超临界二氧化碳萃取接骨木籽油

在萃取压力为40 Mpa、萃取温度为40 ℃的条件下静态萃取15 min后，再动态

萃取3.5 h，得到接骨木籽油的产率为29.64%，相对标准偏差为0.41%。

2.2 标准曲线

以维生素E的峰面积对相应的浓度作图绘制得到标准曲线（图1）。结果表明，维生素E在浓度为5～100 μg/ml范围内呈良好的线性关系。此外，得到峰面积（y）与浓度（x）的回归方程为y=2 440.4x-1 351.4（R²=0.999 9）。

图1 维生素E标准品的标准曲线

2.3 精密度试验

精密吸取维生素E标准品溶液，重复进样5次，求得标准品的峰面积的RSD为0.43%。

2.4 重复性试验

取同一批接骨木油样品5份，按样品测试条件进行测定，求得维生素E含量的RSD为1.17%。

2.5 样品测定

取同一批接骨木籽油5份，按照“1.8”中的方法处理后，在“1.4”色谱条件下进行测定，并计算。用外标峰面积法计算接骨木籽油中维生素E的含量。从维生素E标准品和样品的HPLC图谱（图2）可以看出，样品中维生素E的保留时间tR =29.29 min，与标准品tR基本相同。根据标准曲线进行计算，得出这5份接骨木籽油中的维生素E含量

图2 维生素E标准品（a）和接骨木籽油中维生素E（b）的HPLC图谱

平均为25.92 mg/kg，RSD为0.43%。

2.6 加样回收率

在已知含量的样品中分别加入不同量的维生素E标准品，配制成加标样品液。将加标样品液分别在“1.4”色谱条件下测定维生素E的含量，并計算，结果得出（表1），平均的加样回收率为99.29%，RSD为1.44%（n=5）。

3 讨论

（1）该试验结果表明，用反相高效液相色谱法测定接骨

从前后期产量分析来看，水肥一体化施肥方式可以有效地提高草莓的产量和品质，特别是处理③即水肥一体化采用10 d 1次20-10-20加菌肥^[4]配方的施肥方式增产效果最佳，增产达46.0%，尤其是对后期的增产效果更明显。这可能是因为普通施肥方式后期易造成脱肥，肥量不足，导致后期采收的产量明显减少;而处理③有效弥补了这一缺陷，有效满足大棚草莓生长发育的需肥规律，从而更有效地激发出大棚草莓的生产潜力。

参考文献

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李保会，李青云，李建军，等. 复合微生物菌肥对连作草莓产量和品质的影响[J].河北农业科学，20007， 11（1）：15-17.

[2] 余红，马华升，方献平，等.不同复合基质对“红颊” 草莓产量和品质的影响[J].安徽农业科学， 2012， 40（34）：16515-16517，16520.

[3] 孙文科，王博，唐海龙，等.棚室草莓畸形果和坐果间断发生的原因及防止方法[J].现代农业科技，2014（12）：99-101.

[4] 李建龙，王永和，成太祥，等. 蚯蚓粪改良剂对草莓产量和品质的影响[J].北方园艺，2014（6）：163-165.