吴文华 倪林英 陈锋 郑海磊 李滨

摘要 [目的]研究复方霍山石斛含片是否具有增强免疫力的作用。[方法]按《保健食品检验与评价技术规范》要求，分别对不同剂量组的小鼠进行细胞免疫功能、体液免疫功能、单核—巨噬细胞功能、NK细胞活性的测定。[结果]细胞免疫功能和单核—巨噬细胞功能为阳性，体液免疫功能和NK细胞活性为阴性。[结论]复方霍山石斛含片具有增强免疫力的功能。

关键词 霍山石斛;含片;小鼠;免疫力

中图分类号 S567  文献标识码 A  文章编号 0517-6611（2015）03-052-03

Research on Enhancing Immunity of the Tablet of Dendrobium huoshanense

WU Wenhua¹， NI Linying²， CHEN Feng²， LI Bin2* et al

（1. Anhui Center for Food and Drug Evaluation & Certification， Hefei， Anhui 230051; 2.Jiuxianzun Huoshan Dendrobium huoshanense Co. Ltd.， Luan， Anhui 237000）

Abstract [Objective] To study the effect of the tablet of Dendrobium huoshanense C.Z.Tang et S.J.Cheng on the immune function of mice. [Method] According to demands of Technical Standards for Testing and Assessment of Health Food， cellular immune function， humoral immune function， mononuclear macrophage function and NK cell activity of mice in different dosage group were determined. [Result] The cellular immune function and mononuclear macrophage function is positive， humoral immune function and NK cell activity were negative. [Conclusion] The tablet could enhance immune function of mice.

Key words Dendrobium huoshanense; Tablet; Mice; Immunity

作者简介 吴文华（1984- ），男，安徽巢湖人，主管药师，硕士，从事食品监督管理工作。*通讯作者，主管药师，在读硕士，从事制药工程研究。

收稿日期 20141211

复方霍山石斛含片是以中药霍山石斛、百合、玉竹三者提取物为主要原料，同时添加相关辅料制成的保健食品，所含生物活性物质尤以石斛多糖、玉竹多糖、百合多糖具有抗氧化、免疫调节等作用。将三者进行科学配伍后制成的复方霍山石斛含片，根据《保健食品检验与评价技术规范》^[1]之增强免疫力功能试验的要求，笔者在此对试验动物小鼠进行细胞免疫功能、体液免疫功能、单核—巨噬细胞功能及NK细胞活性测定，研究复方霍山石斛含片是否具有增强小鼠免疫力的功能，为复方霍山石斛含片的推广使用提供理论支持。

1 材料与方法

1.1 样品 复方霍山石斛含片，规格0.8 g/片×40片/瓶，批号130208，由九仙尊霍山石斛股份有限公司提供，样品形态为黄棕色至棕褐色片剂，密封置阴凉干燥处保存。样品人体推荐剂量为3.2 g/（人·d）。

1.2 动物来源及分组 选择购自上海西普尔-必凯实验动物有限公司繁殖的SPF级CI/F1代200只健康雌性小鼠，体重为19.0～21.9 g，试验小鼠生产许可证号为SCXK（沪）20080016，合格证号为2008001634291。试验动物房温度为21～25 ℃、相对湿度为45%～70%，使用许可证号为SYXK（苏）20120041。辐照灭菌饲料由苏州双狮实验动物饲料科技有限公司提供，批准文号为苏饲审（2009）05032。

试验动物按体重随机分为5个大组，每大组40只且分成4个剂量组，每个剂量组10只小鼠，其中第一大组动物测定ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化和利用乳酸脱氢酶法测定NK细胞活性;第二大组动物利用耳廓肿胀法进行DNFB诱导小鼠迟发型变态反应;第三大组动物进行体液免疫功能检测（抗体生成细胞检测和血清溶血素测定）;第四大组动物进行单核—巨噬细胞功能之碳廓清试验;第五大组动物进行单核—巨噬细胞功能之利用半體内法进行腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验。

1.3 剂量选择与受试物给予方式 受试样品的人体推荐剂量为3.2 g/（人·d）（以60 kg体重计），设分别相当于受试样品人体推荐摄入量的5倍、10倍、30倍的3个剂量组，即027、0.53、1.60 g/（kg·bw·d）。另设对照组以无菌水代替受试物，即0 g/（kg·bw·d）。采用无菌水配制受试样品，按高、中、低剂量分别配制浓度为160、53、27 mg/ml，每日一次经口给予受试动物相应剂量的受试物，小鼠灌胃量为0.1 ml/（10g·bw）。连续给药一个月后按照参考文献[1]检测各项功能指标。

2.3.1 复方霍山石斛含片对小鼠碳廓清能力的影响。

经口给予小鼠不同剂量的复方霍山石斛含片一个月后，进行小鼠碳廓清试验^[6]，计算吞噬指数a，并进行方差齐性检验，满足方差齐性要求，用单因素方差分析方法中多个试验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。由表5可知，1.60 g/（kg·bw·d）组小鼠吞噬指数高于0 g/（kg·bw·d）组，差异有统计学意义（P<0.05）。

表5 复方霍山石斛含片对小鼠碳廓清能力的影响

剂量∥ g/（kg·bw·d）动物数∥只胸腺/体重∥%脾脏/体重

∥%吞噬指数aP值

0100.249±0.0430.447±0.0465.68±0.76

0.27100.258±0.0290.452±0.0516.05±0.890.631

0.53100.246±0.0200.411±0.0536.45±0.910.112

1.60100.251±0.0330.410±0.0556.71±0.730.023

2.3.2 复方霍山石斛含片对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的影响。

经口给予小鼠不同剂量的复方霍山石斛含片30 d后，用半体内法进行小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验，计算吞噬指数及吞噬百分率，并将吞噬百分率经sin-1P1/2（P为吞噬百分率，用小数表示）转化后进行方差齐性检验，满足方差齐性要求后，用单因素方差分析方法中多个试验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。由表6可知，1.60 g/（kg·bw·d）组吞噬百分率及吞噬指数高于0 g/（kg·bw·d）组，差异有统计学意义（P<0.05）。

表6 复方霍山石斛含片对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬率及吞噬指数的影响

剂量

g/（kg·bw·d）动物数

只吞噬百分率

%P值吞噬指数P值

01021.3±2.30.25±0.03

0.271022.4±2.40.5820.25±0.040.932

0.531023.5±2.80.1040.27±0.040.427

1.601026.1±1.90.0000.29±0.020.010

2.4 NK细胞活性测定

经口给予小鼠不同剂量的复方霍山石斛含片30 d后，用乳酸脱氢酶测定法进行小鼠NK细胞活性测定，将其经sin-1P1/2（P为NK细胞活性，用小数表示）转化后进行方差齐性检验，满足方差齐性要求，用单因素方差分析方法中多个试验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。由表7可见，0.27、0.53、1.60 g/（kg·bw·d）组NK细胞活性與0 g/（kg·bw·d）组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。

表7 复方霍山石斛含片对小鼠NK细胞活性的影响

剂量

g/（kg·bw·d）动物数

只NK细胞活性

%P值

010 25.2±4.8

0.2710 25.4±6.81.000

0.5310 26.7±10.60.976

1.6010 28.0±8.40.789

3 小结

九仙尊牌清养含片以0.27、0.53、1.60 g/（kg·bw·d）连续给样30 d，按《保健食品检验与评价技术规范》要求，分别对不同剂量组的小鼠进行细胞免疫功能、体液免疫功能、单核-巨噬细胞功能、NK细胞活性的测定。结果发现，复方霍山石斛含片增强免疫力功能之细胞免疫功能试验为阳性、复方霍山石斛含片增强免疫力功能之体液免疫功能试验为阴性、复方霍山石斛含片增强免疫力功能之单核-巨噬细胞功能试验为阳性、复方霍山石斛含片增强免疫力功能之NK细胞活性测定试验为阴性。

根据《保健食品检验与评价技术规范》之增强免疫力功能试验的结果判定，在细胞免疫功能（ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化、DNFB诱导小鼠DTH）、体液免疫功能（抗体生成细胞检测、血清溶血素测定）、单核-巨噬细胞功能（小鼠碳廓清、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞）、NK细胞活性4个方面任2个方面结果阳性，可判定该受试样品具有增强免疫力作用。在该试验条件下复方霍山石斛含片具有增强免疫力功能。

参考文献

[1] 卫生部.保健食品检验与评价技术规范[M].北京：清华同方电子出版社，2003.

[2] 程晓霞，陈少莺，胡奇林，等.小鼠脾淋巴细胞转化试验最佳条件的测定[J].福建畜牧兽医，2003，25（4）：7-9.

[3] 徐孝平，王辉，陈民利，等.盐酸奥芬米洛对二硝基氟苯诱导小鼠迟发型变态反应的影响[J].浙江中医药大学学报，2006，30（6）：617-618.

[4] 张荣标，陈润，陈冠敏，等.灵芝多糖对小鼠免疫功能影响的实验研究[C].预防医学论坛，2012.

[5] 郑平原，易爱纯，胡咏华.松黄颗粒对小鼠迟发型变态反应及血清半数溶血值影响的试验研究[J].中南药学，2009，7（8）：586-589.

[6] 秦光和，景箫，王伟，等.墨汁的注入途径不同对小鼠碳廓清实验的影响[J].毒理学杂志，2007，21（1）：77-78.