黄雪莹范文涛吴银爱王利胜*

（1 广州中医药大学中药学院，广东 广州 510006；2 广州市医药职业学校，广东 广州 510430）

丹参酮ⅡA纳米囊的释放度研究

黄雪莹1，2范文涛1吴银爱1王利胜1*

（1 广州中医药大学中药学院，广东 广州 510006；2 广州市医药职业学校，广东 广州 510430）

目的 研究丹参酮ⅡA纳米囊在人工肠液中释放度，为研究其体内吸收奠定基础。方法 利用透析袋，采用小杯法，转速100r/min，以人工肠液为溶出介质，HPLC法测定丹参酮ⅡA浓度，计算累积溶出百分率，用DDSolver软件对溶出曲线进行多种数学模型拟合，计算溶出参数。结果 在人工肠液中丹参酮ⅡA纳米囊的平均滞留时间Td均长于原料药丹参酮ⅡA。原料药与丹参酮ⅡA纳米囊的体外释放差异较为显著（P＜0.05），有可比性。结论 丹参酮ⅡA纳米囊具有延迟丹参酮ⅡA释放的作用。

丹参酮ⅡA纳米囊；透析袋法；人工肠液

药物制剂的在体内的释药规律直接影响药物显效快慢、作用时间长短、药效高低和毒性大小等，为预测丹参酮ⅡA（TanⅡA）纳米囊（NC）体内释药情况提供参考［1］。本实验利用透析袋法，采取优选处方及工艺制备丹参酮ⅡA纳米囊［2］和原料药，运用《中国药典》第三法：小杯法，以人工肠液为溶出介质，比较原料药与纳米囊释放度差异，研究纳米囊体外释放规律，为研究其体内吸收奠定基础。

1　仪器与试药

1.1仪器：Waters高效液相色谱仪（2487紫外检测器，515泵，美国Waters公司）；N3000色谱工作站（浙江大学）；AUW-120D精密分析天平，日本岛津公司；S-8G智能溶出试验仪，天津因赛科技发展有限公司；透析袋（截留分子量3500），上海金穗生物科技有限公司。

1.2试药：丹参酮ⅡA，纯度98%，南京泽朗医药有限公司；壳聚糖，广州市齐云生物技术有限公司；十二烷基硫酸钠，广东光华科技股份有限公司；甲醇（色谱纯），美国迪马科技公司。

2　方法与结果

2.1丹参酮ⅡA含量测定

2.1.1色谱条件与系统适应性：色谱柱：Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-水（85∶15）（v/v）；流速：l mL/min；检测波长：270 nm；柱温：室温；进样量：20 μL。丹参酮ⅡA保留时间为11.5 min，理论塔板数不小于4000，见图1。

表1　参酮ⅡA、丹参酮ⅡA纳米囊累积释药分数的拟合结果

图1　丹参酮ⅡA的HPLC图（a丹参酮ⅡA标准品；b丹参酮ⅡA纳米囊；c空白纳米囊）

2.1.2标准品配制和标准曲线绘制：精密称取丹参酮ⅡA5mg，置于10 mL容量瓶，用甲醇溶解并定容，即得0.5mg/mL丹参酮ⅡA溶液。精密量取丹参酮ⅡA溶液0.01、0.03、0.05、0.1、1 mL，分别置于10 mL棕色容量瓶中，用甲醇定容，制成一系列浓度分别为0.5、1.5、2.5、5、50 μg/mL的标准溶液。按上述色谱条件，依次进样，以峰面积对浓度进行回归的标准曲线Y=50584149.61X+6156.21916，r=0.9998。线性范围为：0.5～50 μg/mL。

2.1.3供试品溶液的制备：精密称取纳米囊，加入5 mL甲醇，探头超声，得丹参酮ⅡA提取液，定容至10mL，0.22μm滤膜过滤，取续滤液，即得。

2.1.4精密度和稳定性试验：取50 μg/mL丹参酮 ⅡA标准液按2.1.1项下色谱条件测定峰面积，连续测定5次，求取浓度，计算RSD为1.04%。取50 μg/mL丹参酮ⅡA标准液按2.1.1项下色谱条件测定峰面积，分别在0、3、6、9、12 h进样，求取浓度，计算RSD为2.09%。

2.1.5回收率试验：取处理后的同一批丹参酮ⅡA纳米囊供试品溶液3份，各加入0.1、0.3、0.5 mL体积的丹参酮ⅡA标准品溶液，混合均匀后，用0.22 μm的微孔滤膜过滤后，按2.1.1项下色谱条件测定峰面积，连续测定3次，计算回收率，测定三个浓度的回收率均在98%～102%，回收率符合要求。

2.1.6方法专属性实验：分别取丹参酮ⅡA对照品甲醇溶液、丹参酮ⅡA纳米囊供试品溶液，按2.1.1项下色谱条件测定。由色谱图可见，丹参酮ⅡA样品主峰与对照品具有一致的保留时间，处方中辅料不干扰丹参酮ⅡA的测定，方法专属性良好。

2.2体外释放

2.2.1溶出介质的配制及药物在其中的饱和溶解度、透析袋处理：参照《中国药典》2010版第二部附录中人工肠液配制：取磷酸二氢钾6.8 g，加水500 mL使溶解，用0.1 mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至6.8，取胰酶10 g，加水量使溶解，将两液混合后，加水稀释至1000 mL即得。人工肠液中丹参酮ⅡA饱和溶解度为1.38 μg/mL。

透析袋处理：将透析袋剪成8 cm左右的小段，在2 L、2%碳酸氢钠和1 mmol/L乙二胺四乙酸二钠（EDTA）的溶液中将透析袋煮沸10 min。用蒸馏水彻底清洗透析袋后，将透析袋放在pH=8的1mmol/L乙二胺四乙酸二钠的溶液中煮沸10 min。待溶液冷却后，透析袋直接浸泡在EDTA溶液中4 ℃保存。透析袋使用前用去离子水冲洗3次，彻底清洗透析袋［3］。

2.2.2丹参酮ⅡA和丹参酮ⅡA纳米囊的溶出度测定：采用《中国药典》2010版二部附录XC第三法小杯法测定，精密称取丹参酮ⅡA和丹参酮ⅡA纳米囊（以丹参酮ⅡA计），加经脱气处理后的适量溶出介质体积溶解，转入经蒸馏水浸泡处理过的透析袋中，将透析袋两端扎紧，绑与桨上，置于经脱气处理后的溶出介质200 mL的溶出瓶中，转速100 r/min，温度（37±0.5） ℃，依法操作。原料药分别在5 min、15 min、30 min、45 min、1 h、2 h、3 h和5 h取样5 mL，0.45 μm滤膜过滤，每次取样后补加同体积同温度的溶出介质，HPLC测定峰面积，计算各指标成分的累积溶出百分率。丹参酮ⅡA纳米囊分别在5 min、15 min、30 min、45 min、1 h、2 h、3 h、5 h、7 h、9 h、11 h、24 h、36 h、48 h和60 h取样5 mL，0.45 μm滤膜过滤，每次取样后补加同体积同温度的溶出介质，HPLC测定峰面积，计算各指标成分的累积溶出百分率。

2.2.3溶出曲线数学方程拟合和溶出参数计算：运用零级动力学方程、一级动力学方程、Higuchi模型等，用DDSolver［4］拟合，结果见表1。

从拟合结果可以看出，丹参酮ⅡA溶出曲线更符合威布尔分布模型，因此选择威布尔分布模型进行丹参酮ⅡA溶出参数的计算溶出参数Td（溶出63.2%所需时间）。丹参酮ⅡA及其纳米囊的Td分别为3.3 h和14.7 h。

由拟合结果可知在人工肠液中丹参酮ⅡA纳米囊的平均滞留时间Td长于原料药丹参酮ⅡA。原料药与丹参酮ⅡA纳米囊的体外释放差异较为显著（P＜0.05），有可比性。结果表明丹参酮ⅡA纳米囊具有延迟丹参酮ⅡA释放的作用。

3　讨 论

3.1为了模拟生理环境，本实验采取了透析袋法。文献［5］中有丹参酮ⅡA在大鼠肠的吸收机制研究，且丹参酮ⅡA为脂溶性有效成分，胆汁、食物、磷脂、蛋白等肠内容物以及肠道血液循环都可明显影响其溶解与吸收。本文采用在人工肠液中研究其释放度。

3.2影响纳米囊体外释放原因很多，如透析袋的限速过程、载体吸附、纳米囊表面药物等，本实验分别对原料药、纳米囊进行体外释放研究，旨在比较二者的差异。

3.3本实验采用透析袋法研究丹参酮ⅡA纳米囊的体外释药，以累积释药百分数进行不同模型拟合，丹参酮ⅡA纳米囊溶出曲线更符合威布尔分布模型，丹参酮ⅡA纳米囊的Td明显长于原料药，表明其具有良好的缓释作用。

［1］李新中.齐墩果酸聚氰基丙烯酸正丁酯纳米囊的制备及其肝靶向性研究［D］.长沙：中南大学，2007.

［2］吴俊洪，罗惠都.丹参酮ⅡA纳米囊的制备及其性能评价［J］.中药新药与临床药理，2013，24（1）：101-103.

［3］庄晓峰，张宏福.不同透析袋对仿生消化法评定猪饲料原料干物质和磷体外消化率的影响［J］.动物营养学报，2012，24（8）：1527-1533.

［4］Zhang Y，Huo M.DDSolver：an add-in program for modeling and comparison of drug dissolution profiles［J］.AAPS J，2010，12（3）：263-271.

［5］闫红波，吴清.丹参酮类成分及丹参脂溶性提取物在大鼠小肠内的吸收机制比较研究［J］.中国中药杂志，2010，35（21）：2917-2922.

Research on Release Rate of Tanshinone ⅡA Nanocapsule

HUANG Xue-ying1，2， FAN Wen-tao1， WU Yin-ai1， WANG Li-sheng1
（1 School of Chinese Materia Medical， Guangzhou University of Chinese Medicine， Guangzhou 510006， China；2 Guangzhou Pharmaceutical Occupation School， Guangzhou 510430， China）

Objective Studying of tanshinone ⅡA nanocapsule release rate in the artificial intestinal fluid that lays a foundation to study the in vivo absorption. Methods Using the dialysis bag， using the third method of dissolution rate test in the speed of 100r/min， using the artificial intestinal fluid for the dissolution medium to research on release rate of tanshinone ⅡA nanocapsule. The concentration of tanshinone ⅡA in dissolution medium was determined by HPLC. Calculated the cumulative TanⅡA percentage， and then fitted the dissolution curve with the DDSolver Software for a variety of mathematical model and the dissolution parameters. Results In the release rate test， the average residence times of tanshinone ⅡA nanocapsule are longer than the crude drug. The T-test result shows that P＜0.05， which means that they have significant differences between crude drug and tansinone ⅡA nanocapsule release rate. Conclusion Tanshinone ⅡA nanocapsule has a slow-release effect.

Tanshinone ⅡA nanocapsule； The method of dialysis bag； Release rate

R9

B

1671-8194（2015）012-0002-02