周婧　王洪兰　马宏跃　闫文丽　龚艳　钱琎　段金廒　吴启南

摘 要 研究了除草剂苄嘧磺隆皮肤接触污染对中华大蟾蜍分泌蟾酥化学品质的影响。蟾酥样品经甲醇提取，以乙腈-1%甲酸水溶液为流动相，液相色谱（反相C18柱）分离＼， 串联质谱（LC-MS/MS）分析检测。质谱条件为：MRM模式，脱溶剂温度500℃，碰撞电压30 eV，锥孔电压为30 V。结果表明，建立的LC-MS/MS测定方法对6种蟾蜍甾烯标准物质的检出限为0.42～4.86 ng/mL，相关系数R2=0.9953～0.9992，日内和日间RSD为3.8%～6.8%和4.0%～8.8%；加样回收率为96.9%～109.6%，相对标准偏差为2.0%～8.1%。应用此方法检测了36种蟾蜍甾烯化合物，有20余种化合物自身质谱积分面积在苄嘧磺隆污染前后发生改变，苄嘧磺隆皮肤接触污染可以改变蟾蜍耳后腺蟾蜍毒素的表达模式。本方法可应用于蟾蜍甾烯类物质检测。

关键词 中药资源学； 蟾蜍； 苄嘧磺隆； 蟾酥

1 引 言

蟾酥为中华大蟾蜍Bufo bufo gargarizans Cantor或黑眶蟾蜍Bufo melanostictus Schneider耳后腺的干燥分泌物。以往研究显示，蟾酥化学质量差异较大[1，2]，不同产地商品中蟾蜍甾烯类成分含量相差数倍至数十倍。其原因除了遗传因素外，环境影响尤为重要。据调查，中药材蟾酥主要来自于野生蟾蜍，蟾蜍皮肤具有通透性，对环境重金属、农药、生活（工业）污水敏感[3]，是环境科学研究的前哨物种。污染物能在蟾蜍体内蓄积和放大，但是污染物对蟾蜍耳后腺分泌物形成的影响研究甚少。

蟾酥主要含有强心苷类蟾蜍甾烯化合物，其含量测定方法大体可分为有LC-UV和LC-MS两类。MS在蟾蜍甾烯定性鉴别和定量灵敏度方面均显著优于UV方法。已有学者采用Q-TOF和LTQ-Orbitrap对多种蟾蜍甾烯的质谱二级裂解模式进行特征和含量分析[3～10]。……