杨静+++++张建军++++++钟森

[摘要] 目的 研究中药雄黄主要成分As2S2对人肝癌细胞株QGY-77 03增值和凋亡的影响及其可能机制。方法 2012年9月—2013年4月，分析不同浓度的As2S2处理QGY-7703细胞后，MTT法测定细胞增殖抑制率；流式细胞仪检测细胞凋亡率；免疫细胞化学方法检测PCNA的表达情况。结果 较低浓度（7.5 mg/L）的As2S2对QGY-7703细胞的生长无影响；15～120 mg/L的As2S2可抑制细胞的生长，具有时间依赖性和浓度依赖性（P<0.01）。As2S2在15～30 mg/L范围内，细胞凋亡率随浓度和作用时间增加而增加（P<0.01）；60 mg/L组凋亡率比低浓度组低，表现为继发性坏死细胞增多。As2S2处理组可明显降低PCNA蛋白的阳性表达（P<0.01）。 结论 As2S2在一定的浓度范围内可以诱导QGY-7703细胞发生凋亡，通过下调PCNA的表达抑制细胞的增殖，随着作用时间的延长和（或）浓度的提高，As2S2表现出一定的细胞毒作用，促进肿瘤细胞坏死。

[关键词] 雄黄；肝细胞癌；凋亡

[中图分类号] R736 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2015）01（b）-0012-02

Effects of Realgar on the Proliferation and Apoptosis of Human Hepatocellular Carcinoma Cell Line QGY-7703

YANG Jing1 ZHANG Jianjun2 ZHONG Sen3

1.Department of Infectious Diseases， Yaan People's Hospital， Yaan， Sichuan Province， 625000， China；

2.Department of Infectious Diseases， The Affiliated Hospital of Luzhou Medical College， Luzhou， Sichuan Province， 646000， China；

3.Department of Hepatopathy， Teaching Hospital of Chengdu University of T.C.M， Chengdu， Sichuan Province， 610072， China

[Abstract] Objective To study the effect of realgar main component As2S2 on the proliferation and apoptosis of human hepatocellular carcinoma cell line QGY-7703 and the possible mechanism. Methods From September 2012 to April 2013 QGY-7703 cell was treated by different concentrations of As2S2 first， then the cell proliferation inhibition rate of QGY-7703 cell was detected by MTT method； the cell apoptosis was tested by flow cytometry； the expression of PCNA was detected by immunocytochemistry method. Results As2S2 at low concentration（7.5mg/L） had no effect on the growth of QGY-7703 cells； As2S2 with the concentration of 15mg/L～120mg/L could inhibit the growth of QGY-7703 cells， the inhibitory rate depended on the concentration and time （P<0.01）. As2S2 with the concentration of 15 mg/L～30 mg/L， the cell apoptotic rate increased with the increase of concentration and action time （P<0.01）. The cell apoptotic rate of 60 mg/L group was lower than those of low concentration groups， and the secondary necrotic cells increased. The positive expression level of PCNA protein of As2S2 group decreased significantly（P<0.01）. Conclusion As2S2 in a certain range of concentration can induce the apoptosis of QGY-7703 cells， inhibit the proliferation of the cells by down-regulation of the expression of PCNA. And as the longer duration of action and（or） the increase of the concentration， As2S2 showed certain cytotoxic effect， promoting tumor cell necrosis.

[Key words] Realgar； Hepatocellular carcinoma； Apoptosis

雄黄的主要成分为As2S2，具有解毒杀虫、燥湿祛痰、截疟的功效[1]，常用来治疗痈肿疗疮、蛇虫咬伤、虫积腹痛、惊痫和疟疾等疾病。近年来，As2O3在白血病的治疗中疗效显著，已被广泛应用于多种恶性肿瘤的研究和临床治疗。作为毒性更小的含砷化合物，雄黄及其复方制剂在白血病治疗中也取得了可喜的成绩[2]，其抗肿瘤效应及机制的研究也越来越深入[3]。但有关雄黄对实体瘤的报道较少。自2012年9月—2013年4月，该实验以人肝癌细胞株QGY-7703细胞为研究对象，探讨雄黄的主要成分As2S2对肝癌细胞的影响及其作用机制，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

As2S2（纯度98%）购自美国Sigma公司，配制方法参照文献4，RPMI 1640袋装培养基购自美国Gibco公司，小牛血清购自杭州四季青生物公司，DMSO及MTT购自美国Amresco公司，AnnexinV-FITC 凋亡检测试剂盒购自美国Beckman公司，鼠抗人PCNA单克隆抗体购自武汉博士德生物工程有限公司。人肝癌细胞株QGY-7703由泸州医学院实验室提供。

1.2 细胞培养

人肝癌细胞株QGY-7703常规复苏后用含10%新生小牛血清的RPMI 1640培养液在含5% CO2、37℃培养箱中培养。……