刘 丽，黄赞松,*，黄衍强，周喜汉，尹毅霞，覃月秋

(1.广西医科大学 研究生学院2011级12班， 广西 南宁 530021； 右江民族医学院 2.消化疾病研究所 附属医院 消化内科；3.微生物免疫学教研室， 广西 百色 533000)



CagA+H.pylori对肝癌HepG2细胞增殖及TβRI、SMAD4和SMAD7表达的影响

刘 丽1，黄赞松1,2*，黄衍强3，周喜汉2，尹毅霞2，覃月秋2

(1.广西医科大学 研究生学院2011级12班， 广西 南宁 530021； 右江民族医学院 2.消化疾病研究所 附属医院 消化内科；3.微生物免疫学教研室， 广西 百色 533000)

肝癌病因复杂，有研究发现幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,H.pylori)与肝癌相关，机制未明。CagA是H.pylori的毒力因子， CagA+H.pylori与肝癌可能有联系。TGF-β(transforming growth factor beta, TGF-β)/Smads信号通路任何环节异常，均会造成肿瘤始动。TGF-β信号传导依靠TβR及Smads，本实验主要探讨CagA+H.pylori对肝癌细胞的作用及对TβRI、SMAD4和SMAD7表达的影响，为研究CagA+H.pylori在肝癌发病机制中的作用提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 细胞: 人肝癌HepG2细胞(中科院上海细胞库)培养于含10%胎牛血清(Gibico公司)的改良型1640培养基(Hyclone公司) (简称培养液)，置饱和湿度、37 ℃、5% CO2培养箱中培养。

1.2H.pylori: 参照文献[1]鉴定CagA+H.pylori，培养后收集，紫外分光光度仪检测浓度，将菌液调整为1.0×106CFU(菌落形成单位，colony formation unit)/mL后连续5次10倍稀释， 1.0×105、1.0×104、1.0×103、1.0×102和1.0×101CFU/mL。

1.3 MTT法检测细胞增殖情况:用MTT法检测CagA+H.pylori作用24 h对细胞增殖的影响，计算公式：增殖率(PI)=(实验组A值-对照组A值)/对照组A值×100%(表2)。

1.4 CagA+H.pylori与细胞孵育:细胞调整为1×106个/mL，接种到培养瓶，置饱和湿度、37 ℃、5% CO2培养箱中培养24 h后换无血清的培养液同步化处理24 h，各瓶加上述不同浓度CagA+H.pylori，每个浓度重复3次，作用24 h。阴性对照组不加CagA+H.pylori，加等量培养液。

1.5 RNA提取及反转录反应:用Trizol试剂提取总RNA。按Prime Script RT reagent Kit With gDNA Eraser (perfect real time)反转录试剂盒(TaKaRa公司)说明书制备cDNA。……