上调miR- 200a的表达减弱TGF-β1刺激的大鼠胰腺星状细胞活化和胶原合成

2015-08-07张尤历王国英

基础医学与临床 2015年1期

关键词：检测

张尤历，王国英，赵义，李萍，刘鑫，倪鑫，徐岷

(江苏大学附属医院消化内科，江苏镇江 212000)

研究论文

上调miR- 200a的表达减弱TGF-β1刺激的大鼠胰腺星状细胞活化和胶原合成

张尤历，王国英，赵义，李萍，刘鑫，倪鑫，徐岷*

(江苏大学附属医院消化内科，江苏镇江 212000)

目的探讨miR- 200a对转化生长因子β1(TGF-β1)刺激的大鼠胰腺星状细胞(PSCs)活化和胶原蛋白合成的影响。方法用组织块法培养分离PSCs，免疫荧光染色检测结蛋白(desmin)、神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达鉴定PSCs；取新鲜培养的第2代PSCs，设空白对照组、TGF-β1组、TGF-β1+miR- NC组、TGF-β1+miR- 200a mimic组，Western blot法和细胞免疫荧光染色法检测α-SMA和Ⅰ型胶原蛋白(collagen Ⅰ)的表达，荧光定量PCR检测α-SMA、collagen Ⅰ mRNA及miR- 200a的表达。结果TGF-β1可刺激大鼠PSCs活化及促进胶原蛋白的合成(P<0.05)，且呈时间依赖性；转染miR- 200a mimic后，在相同浓度的TGF-β1刺激下，α-SMA和collagen Ⅰ的蛋白和mRNA表达明显降低(P<0.01)。结论上调miR- 200a的表达，可减弱TGF-β1对大鼠PSCs活化和胶原蛋白合成的刺激作用，其可能的机制是抑制TGF-β1的生物学作用。

TGF-β1；PSCs；miR- 200a；纤维化

慢性胰腺炎(chronic pancreatitis，CP)主要的病理学改变是胰腺组织纤维化和细胞外基质(extracellular matrix，ECM)异常沉积[1]。胰腺星状细胞(pancreatic stellate cells，PSCs)是纤维化过程中主要的始动和效应细胞。正常情况下，PSCs呈静息状态；当胰腺受到刺激时，PSCs可活化为肌成纤维样细胞，失去维生素A脂滴，表达特异性标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA)，合成大量ECM，主要有Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白(collagen Ⅰ，Ⅲ)和纤维连接蛋白(fibronectin，FN)等[2]。

MicroRNA(miRNA)通过调节靶基因调控一系列细胞功能，如增殖、分化和致癌等[3- 4]。研究表明miR- 200a在器官纤维化中起了重要作用，但是在胰腺纤维化中的作用尚不清楚[5]。本研究旨在探讨miRNA- 200a对TGF-β1刺激的大鼠PSCs活化和胶原合成的影响，为胰腺纤维化的基因治疗提供理论依据。