肖 琳，王 平，董俊红，王守训，刘顺梅

(潍坊医学院 基础医学院 生化教研室， 山东 潍坊 261042)



研究论文

RNAi双沉默Survivin和hTERT基因抑制人结肠癌SW480细胞增殖促进凋亡

肖 琳，王 平，董俊红，王守训*，刘顺梅

(潍坊医学院 基础医学院 生化教研室， 山东 潍坊 261042)

目的探讨双向沉默Survivin和hTERT基因对结肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响，为结肠癌的基因治疗提供实验依据。方法设计并构建能够稳定转录shRNA并可分别及联合干扰Survivin和hTERT分子表达的质粒，将其转染结肠癌SW480细胞后, 分阴性对照组、空白质粒对照组、 Survivin RNAi组、hTERT RNAi组和Survivin-hTERT RNAi组。转染48h后 TRAP-PCR-ELISA 法检测端粒酶活性，RT-PCR 法检测Survivin和hTERT mRNA的表达，Western blot检测Survivin和 hTERT蛋白的表达，流式细胞仪及cck-8法分别检测细胞凋亡和细胞增殖的变化。结果Survivin-hTERT RNAi组SW480细胞端粒酶活性明显下降(P<0.01)，Survivin-hTERT RNAi组Survivin及hTERT的mRNA水平较正常对照组分别减低82.8%和73.6%(P<0.01)，蛋白表达抑制率分别为79.2%和66.7%(P<0.01)。实验各组中Survivin-hTERT RNAi组细胞增殖抑制率和凋亡率最高，分别为43.6%±0.1%和39.2%±2.3%(P<0.01)。结论Survivin和hTERT双干扰质粒可明显下调Survivin和hTERT蛋白的表达，抑制结肠癌SW480细胞的增殖，促进其凋亡。

RNA干扰；Survivin；hTERT；结肠癌

结肠癌(colorectal cancer，CRC)是比较常见的消化道恶性肿瘤，也是主要的致死性疾病之一，在欧美国家，结肠癌在恶性肿瘤死亡原因中排第2位[1- 2]。而在中国，在人们饮食结构改变、高度的工作、精神压力以及空气环境污染等多种因素的作用下，结肠癌的发病率逐年上升。同时结肠癌易发生转移，治疗效果差，因此本研究选取Survivin和hTERT这两个跟结肠癌发生、发展密切相关的两个基因用RNAi的方式以探讨如何更好的治疗结肠癌。Survivin是凋亡抑制蛋白家族(IAPs)的重要成员之一，在细胞周期、细胞凋亡以及肿瘤血管的形成中都发挥着重要的作用[3]。端粒酶已被公认为已知的最广谱的肿瘤标志物之一，在多种肿瘤中均有不同程度的表达[4]。本研究同时沉默Survivin和hTERT基因, 探讨其对结肠癌细胞增殖及凋亡的影响。……