汪智琼张 玲石玉琴李红飞张志兵, 3**.武汉科技大学医学院公共卫生学院（武汉 430065） ；2.华中科技大学同济医学院附属同济医院; 3. Virginia Commonwealth University, Richmond, VA

·论 著·

ARMARM结构的缺失对SPAG6SPAG6在哺乳细胞中定位的影响*

汪智琼1, 2张 玲1石玉琴1李红飞1张志兵1, 3**
1.武汉科技大学医学院公共卫生学院（武汉 430065） ；2.华中科技大学同济医学院附属同济医院; 3. Virginia Commonwealth University, Richmond, VA

摘要目的 本研究构建精子相关抗原6（SPAG6）基因全长及6个不同长短ARM序列的真核表达载体pEGFPN2-SPAG6-△ARM，并使其在CHO细胞中表达，观察全长及6个ARM结构缺失后对真核细胞CHO细胞中SPAG6蛋白定位的影响。方法 利用NCBI数据库，寻找小鼠SPAG6蛋白的保守功能区，分析全长蛋白序列，检索出SPAG6有7个ARM区域。利用PCR技术扩增出6个缺失不同ARM结构的SPAG6 cDNA，测序后亚克隆至携带绿色荧光蛋白基因的pEGFP-N2真核表达载体中，对阳性克隆进行酶切和测序鉴定，将构建的重组质粒转染到CHO细胞中，分别提取细胞蛋白进行Western blot检测。利用共聚焦激光扫描显微镜观察7个不同SPAG6/GFP融合蛋白在CHO细胞内的定位。结果酶切和测序鉴定表明，全长及6个缺失不同长短ARM结构的真核表达质粒构建成功，转染实验发现重组质粒均能够在CHO细胞中表达，但仅全长表达产物定位于微管，缺失任何一个ARM区域都可影响在细胞中的微管定位。结论SPAG6在哺乳动物细胞内的正确定位依赖于全长。该研究为进一步研究SPAG6蛋白的结构与功能奠定基础。

关键词精子相关抗原6基因; ARM结构域; 不育, 男性

Key woorrddss Sperm- associated antigen 6; armadillo domains; infertility, male

男性不育是临床上常见的一种疾病，随着社会现代化进程的发展，空气质量、环境卫生、食品安全及个人婚育观等问题的不断凸显，近年来发病率有急剧上升趋势。……