郑梦琳等

摘 要 建立了实时荧光聚合酶链式反应（PCR）偶联高特性核酸侵入反应检测单核苷酸多态性（SNP）的方法。优化了体系中flap核酸内切酶1（FEN1酶）和野生型检测探针等用量，确定了最佳反应条件，即FEN1酶用量为1.5 U，野生型检测探针用量为0.125 μmol/L，0.5 μmol/L Invader突变型检测探针，各0.25 μmol/L通用野生型（VIC）和突变型（FAM）荧光共振转移发卡探针，显著降低了野生型样本和突变型样本背景信号，避免了背景信号对检测结果分型的干扰。采用本方法对编码乙醛脱氢酶2（ALDH2）基因ALDH2*2位点21例样本、细胞色素P450 2C19基因CYP2C19*2和CYP2C19*3位点各19例样本进行分型检测，结果表明， ALDH2*2位点GG纯合10例，GA杂合8例，AA纯合3例；CYP2C19*2位点GG纯合9例，GA杂合8例，AA纯合2例；CYP2C19*3位点GG纯合18例，GA杂合1例。使用焦磷酸测序进行验证，两种方法检测结果一致。本方法特异性好、操作简便、耗时短、成本低，可实现对SNP单管闭管无污染的分型检测。

关键词 实时荧光PCR； 核酸侵入反应； 单核苷酸多态性； 乙醛脱氢酶2基因； 细胞色素P450 2C19基因