戴 璐 傅文凡 陈文彬

肺腺癌细胞中miR-125a-5p对吉非替尼耐药影响

戴 璐 傅文凡 陈文彬

【摘要】目的 研究肺腺癌细胞中miRNA对吉非替尼耐药的影响。方法 荧光定量PCR检测miR-125a-5p在肺腺癌细胞PC9及吉非替尼耐药细胞PC9/GR中的表达；改变miR-125a-5p在细胞株中的表达，观察其对吉非替尼耐药的影响。结果 miR-125a-5p在PC9细胞及PC9/GR细胞中表达有差异，增加miR-125a-5p在PC9中的表达，增加细胞对吉非替尼耐药。结论 miR-125a-5p可促进肺腺癌细胞对吉非替尼产生耐药。

【关键词】肺腺癌；miR-125a-5p；吉非替尼；耐药

Objective To study the influence of miRNA to gefitinib resistance in Lung adenocarcinoma cells． Methods The miR-125a-5p expressions in PC9 and PC9/GR were analyzed by real-time PCR． Observed the influence of the Change of miR-125a-5p expression to gefitinib resistance ． Results The miR-125a-5p expression in PC9 and PC9/GR were significant differences，and increaseing the miR-125a-5p expression in PC9 obviously promote drug resistance to gefitinib． Conclusion The miR-125a-5p can promote drug resistance to gefitinib in Lung adenocarcinoma cells．

【Key words】 Lung adenocarcinoma，The miR-125a-5p，Gefitinib，Resistance

目前在全球范围内，肺癌在所有恶性肿瘤中死亡率位居第一，发病率第二，而且大多数肺癌患者确诊时已发展至晚期［1］。吉非替尼作为不可手术的晚期肺腺癌患者的一线治疗之一，具有有效率高、毒副作用小、服药方便等优势，在临床中广泛应用。然而用药患者最终都将产生耐药，吉非替尼耐药的机制主要有T790M、cMET扩增、kras突变等［2］。本文主要研究miR-125a-5p对吉非替尼耐药的影响。

1 材料与方法

1.1 实验材料

PC9（肺腺癌细胞株），PC9/GR（耐药细胞株），吉非替尼（AstraZeneca），细胞培养液及胎牛血清（Hyclone），CCK8 （Dojindo），miRNA mimics（ 锐 博 生 物 ），TurboFectTMsiRNA Transfection Reagent（Fermentas），PCR引物（锐博生物），SYBR Green Mix（TOYOBO），逆转录试剂盒（Takara）。

1.2荧光定量PCR检测miR-125a-5p表达

PC9及PC9/GR细胞均在含10%胎牛血清培养液中，培养至对数生长期后消化分离，提取其总RNA，质检合格后，应用荧光定量PCR检测PC9及PC9/GR细胞中miR-125a-5p的表达。

1.3 吉非替尼的敏感性检测

待PC9细胞生长至对数期，消化分离，接种于96孔板中（细胞浓度：2×104个/mL）。实验组转染miR-125a-5p mimics 升高其表达，对照组不转染。24 h后两组都加入50 nmol/L吉非替尼，药物作用72 h后，用CCK-8检测细胞存活，计算出抑制率。

1.4 统计学方法

应用SPSS 13.0软件进行单因素方差分析或t检验，检验水准P＜0.05。

2 结果

2.1 miR-125a-5p的表达

荧光定量PCR检测miR-125a-5p在PC9/GR中表达值比PC9中表达值降低约2.5倍，且P＜0.05。

2.2 吉非替尼的敏感性

将miR-125a-5p mimics转染至PC9，增高miR-125a-5p的表达，加入50 nmol/L吉非替尼。实验组抑制率（14.92%）比对照组抑制率（41.03%）降低了约26.11%，且P＜0.01。见表1。

表1 吉非替尼的敏感性比较

3 讨论

吉非替尼是EGFR敏感突变的晚期肺腺癌患者的一线治疗方案，具有毒副作用小、服用方便、患者易于接受等优点，广泛应用于临床，取得了良好的疗效，但是绝大多数患者产生耐药现象。其耐药机制主要有T790M、cMET扩增、kras突变等［2］，进一步研究其耐药机制及如何克服耐药引起了广大研究者的兴趣。

本课题组前期已对PC9及PC9/GR进行芯片检测，筛选出多个差异表达miRNAs，其中包括miR-125a-5p在PC9/GR中明显低表达［3］。有研究证明miR-125a-5p可通过上调Rock-1促进肺癌细胞转移［4］。但是有趣的是，另一个研究组证明miR-125a-5p通过EGFR信号通路抑制肺癌细胞的侵袭转移［5］。

本实验证明增加miR-125a-5p在PC9中的表达，促进其对吉非替尼产生耐药，但miR-125a-5p的作用靶基因仍需进一步研究。综上所诉，本文为阐明吉非替尼耐药机制增加依据，可为临床上实现克服吉非替尼耐药提供理论基础。

参考文献

［1］ Siegel RL，Miller KD，Jemal A ． Cancer statistics，2015［J］． CA Cancer J Clin，2015，65（1）：5-29．

［2］ Suda K，Onozato R，Yatabe Y，et al． EGFR T790M mutation：a double role in lung cancer cell survival？［J］． J Thorac Oncol，2009，4（1）：1-4．

［3］ 戴璐，赵健，张绪超 等． 非小细胞肺癌吉非替尼耐药相关miRNAs的筛选鉴定［J］． 中国肿瘤临床， 2012，39（3）：126-130．

［4］ Jiang L，Zhang Q，Chang H，et al． ［hsa-miR-125a-5p Enhances Invasion in Non-small Cell Lung Carcinoma Cell Lines by Upregulating Rock-1］［J］． Zhongguo Fei Ai Za Zhi，2009，12（10）：1069-1073．

［5］ Wang G，Mao W，Zheng S，et al． Epidermal growth factor receptor-regulated miR-125a-5p--a metastatic inhibitor of lung cancer［J］． FEBS J，2009，276（19）：5571-5578．

【中图分类号】R734．2

【文献标识码】A

【文章编号】1674-9316（2015）21-0149-02

doi：10．3969/j．issn．1674-9316．2015．21．115

作者单位：510095 广州医科大学附属肿瘤医院肺肿瘤科

基金项目：2012年广州医学院青年基金项目（项目编号：2012A14）

Effect of the miR-125a-5p on Grug Resistance in Lung Adenocarcinoma Cells

DAI Lu FU Wenfan CHEN Wenbin Cancer Center of Guangzhou Medical University，Lung Tumor Department，Guangzhou 510095，China

【Abstract】