乌兰十三味汤散中栀子苷的含量测定

2015-07-13袁新敏

中国民族医药杂志 2015年7期

袁新敏青松

(内蒙古自治区食品药品检验所，内蒙古呼和浩特 010020)

乌兰十三味汤散是由土木香、苦参、悬钩子木、山奈、诃子、川楝子、栀子、茜草、枇杷叶、紫草茸、橡子、紫草、金莲花等13 味药组成的复方蒙药制剂。栀子为处方中治疗热病的主味药，文献记载［1］其中含有栀子苷、羟异栀子甙、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷、山栀苷等8 种以上活性成分，主要为栀子苷。因此本文对制剂中的栀子苷进行了HPLC含量测定方法研究。经方法学考察及阴性对照试验，表明此法专属性强，可作为乌兰十三味汤散的含量测定方法。

1 样品来源

样品由内蒙古库伦蒙药厂(批号100315)、乌兰浩特中蒙制药有限公司(批号060304、060505)提供。

2 仪器与试药

2.1 仪器：岛津LC-10ATVP 泵SPD-10A 型检测器，SCL-20A 色谱工作站。

2.2 试剂与试药：栀子苷对照品(批号：110749-200714)购自中国食品药品检定研究院;甲醇为分析纯和色谱纯，乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

3 分析方法验证

3.1 色谱条件：色谱柱：色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，本实验研究采用Phenomenex C18 柱(250mm ×4.6mm，5μ)和Shim-packC18 柱(250 mm × 4.6mm，5μ)两种品牌色谱柱;流动相：乙腈-水(15：85);流速：1mL/min;检测波长为238nm;理论板数按栀子苷峰计不得低于1500。

3.2 供试品溶液的制备：取本品约1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率50Hz)30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，滤液用0.45μm 微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

3.3 对照品溶液的制备：精密称取栀子苷对照品适量，加甲醇制成每1mL 约含60ug 的溶液，即得。

3.4 阴性对照试验：取按处方量并以相同工艺制备的阴性对照(缺栀子)1g，按含量测定项下的方法操作，进样量10μl。测得结果为：阴性对照色谱图中在栀子苷对照品色谱图中相对应的保留时间处无色谱峰出现。表明其它成分对栀子苷的测定无干扰。见图1 ～3。

图1 阴性对照色谱图

图2 对照品色谱图

图3 供试品色谱图

3.5 线性关系考察：精密称取栀子苷对照品3.35mg，置25mL 量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(浓度为0.134mg/mL)。分别精密吸取2、5、10、15、20μL 进样，按上述色谱条件测定，以峰面积对进样量进行回归分析，结果栀子苷在242.8ng ～2428ng 范围内呈良好的线性关系。回归方程为Y =1515.7X-9962，r=0.99998。

3.6 稳定性试验：取同一份供试品溶液，分别于0h、2h、4h、8h、12h、24h、进样测定，结果表明栀子苷在24h 内的面积积分值基本稳定不变。RSD 为0.2(%)。

3.7 重复性试验：取同一批号(批号100315)供试品6 份，各取约1.0g，分别按含量测定项下方法操作，测定每份含量，结果平均含量为6.1985mg/g，RSD 为0.7%。

3.8 加样回收试验：取供试品(批号100315，含量6.1985mg/g)6 份，各约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别依次精密加入栀子苷对照品3.00mg，再精密加入甲醇50 mL，摇匀，称定重量，分别按上述供试品溶液制备方法和色谱条件测定每份含量，计算回收率，结果见表1。