徐志文，王 静,刘小娟，陈晓云，任泽林

(1.山东大学 药学院，山东 济南，250012；2.辰欣药业股份有限公司，山东 济宁272073；3.济宁市第二人民医院，山东 济宁272049；4.济宁京华眼科医院，山东 济宁272000)



丙氨酰谷氨酰胺注射液处方筛选及稳定性研究

徐志文1,2，王 静2,刘小娟3，陈晓云4，任泽林2

(1.山东大学 药学院，山东 济南，250012；2.辰欣药业股份有限公司，山东 济宁272073；
3.济宁市第二人民医院，山东 济宁272049；4.济宁京华眼科医院，山东 济宁272000)

目的：筛选丙氨酰谷氨酰胺注射液的制备工艺并进行初步稳定性研究。方法：通过对关键控制点活性炭用量、pH值、灭菌参数、充氮与否的筛选确定最佳处方，考察样品的稳定性。结果：最佳处方关键控制点为活性炭用量0.05%，pH值为5.4～6.0，灭菌参数为115℃、30min，配制及灌装过程全程充氮，以该处方制备的样品在市售包装条件下经加速、室温留样考察，质量稳定。结论：该处方设计合理，制备的注射液稳定。

丙氨酰谷氨酰胺注射液；制备工艺；稳定性

丙氨酰谷氨酰胺注射液主要成分为丙氨酰谷氨酰胺，其在体内可迅速分解为谷氨酰胺和丙氨酸，作为营养物质在机体内进行代谢。适用于需要补充谷氨酰胺的患者，包括处于分解代谢和高代谢状况的患者[1-3]。国家药品标准提高后，发现本品的已知杂质环-(L-丙氨酰-L-谷氨酰)超过限度(≤0.05%)，因此本研究对其生产工艺严格筛选，制备出稳定的样品。

1 仪器与试药

1.1 仪器

日本岛津LC-20AT高效液相色谱仪(SPD-20A二极管阵列检测器、RID-10A泵)，紫外-可见分光光度计，XS205Du型电子分析天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)、HWS-12电热恒温水浴锅(上海精密科学仪器有限公司)；320-S型酸度计(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)。

1.2 试药

丙氨酰谷氨酰胺(批号140421301；厂家：辰欣药业股份有限公司)、环-(L-丙氨酰-L-谷氨酰胺)对照品(批号：1049962；厂家：瑞士巴亨公司(Bachem))、环-(L-丙氨酰-L-谷氨酰)对照品(批号：0546372；厂家：瑞士巴亨公司(Bachem))、L-焦谷氨酰-L-丙氨酸对照品(批号：1049580；厂家：瑞士巴亨公司(Bachem))、L-焦谷氨酸对照品(批号：1.2；厂家：EDQM)、D-丙氨酰-L-谷氨酰胺对照品(批号：1034612；厂家：瑞士巴亨公司(Bachem))、丙氨酰谷氨酰胺对照品(批号：X2GBC-MS；厂家：东京化成工业株式会社(Tokyo Chemical Industry Co.,Ltd))、L-丙氨酰-L-谷氨酸对照品(批号：1034574；厂家：瑞士巴亨公司(Bachem))；活性炭(批号：1001087，厂家：上海兴长活性炭有限公司)。

2 制备工艺

2.1 充氮工艺

为提高样品稳定性，选择在配料和灌封时充入氮气，以置换存在于溶液中和玻璃瓶上方的氧气，提高本品的稳定性。为此，进行了充氮气与不充氮气的比较研究。

充氮气样品制备：量取800mL注射用水，持续充入氮气，冷却至50℃，加入丙氨酰谷氨酰胺200g，搅拌使完全溶解。用0.1mol/L盐酸或者氢氧化钠调节pH值至5.4～6.0，补加注射用水至全量。充氮下灌封于常规工艺洗净的50mL输液瓶中，上塞、轧盖。115℃灭菌30min。

不充氮气样品制备：除配制和灌封全过程不充氮气外，其他操作同充氮气样品的制备。

将充氮与不充氮的灭菌样品分别在高温60℃下放置10天，取样检测关键质量指标，并与0天数据比较，结果见表1。

表1 充氮工艺研究结果

结果表明，0时充氮样品质量要好于0时不充氮样品；60℃放置10天后，充氮样品与0时相比，pH值、有关物质及含量变化不大，均合格；未充氮样品与0时相比，pH值及含量基本没变，但有关物质变化较大，部分杂质超限。故本品在配制和灌装时充氮进行氧气置换对产品质量有明显的提高，选择在生产工艺中全程充氮。

2.2 不同pH值筛选

国内已上市的丙氨酰谷氨酰胺注射液(50mg∶10g) pH值范围为5.4～6.0，据此，对本品在该pH值范围内的稳定性进行试验，以最终确定本品的pH值范围。

样品制备方法：量取1 200mL注射用水，持续充入氮气，冷却至50℃，加入丙氨酰谷氨酰胺300g，搅拌使完全溶解。

将配制好的样品平均分为3份，分别用0.1mol/L盐酸或氢氧化钠调节pH值至5.4、5.7、6.0，补加注射用水至全量。充氮下灌封于常规工艺洗净的50mL输液瓶中，上塞、轧盖。115℃灭菌30min，将灭菌后的成品于60℃下放置10天考察样品的稳定性。结果见表2。

经试验证明，本品在pH 5.4～6.0范围内，经115℃灭菌30min得到的成品高温放置10天后与0时相比：pH值、性状几无变化；已知杂质有所增大；含量基本没变；三个不同pH值的样品平行性良好，因此，选择本品的pH值为5.4～6.0。

2.3 活性炭用量筛选

样品制备方法：量取1 200mL注射用水，持续充入氮气，冷却至50℃，加入丙氨酰谷氨酰胺300g，搅拌使完全溶解。用0.1mol/L盐酸或者氢氧化钠调节pH值至5.4～6.0。

将配制好的样品平均分为3份，一份不加药用炭吸附，另外两份分别加入0.05%(g/mL)、0.08%(g/mL)药用炭，搅拌15min，脱碳后，补加注射用水至全量，搅匀。过滤后考察半成品的性状、可见异物、细菌内毒素、pH值和含量。结果见表3。

表2 不同pH值筛选结果

试验结果说明，在配制过程中加0.05%(g/mL)及0.08%(g/mL)药用炭，所制成样品的性状、可见异物符合规定，对pH值没有影响，对主药略有少量吸附，为保证在以后生产过程中产品的质量，确定在配制过程中加入0.05%(w/v)活性炭。

表3 活性炭用量筛选

2.4 灭菌温度选择

样品制备方法为：量取1 200mL注射用水，持续充入氮气，冷却至50℃，加入丙氨酰谷氨酰胺300g，搅拌使完全溶解。用0.1mol/L盐酸或者氢氧化钠调节pH值至5.4～6.0，加入0.75g活性炭，搅拌吸附15min，脱碳后，补加注射用水至全量。

充氮下灌封于常规工艺洗净的50mL输液瓶中，上塞、轧盖。将样品分为3份，一份留作半成品，另两份分别选用115℃灭菌30min，121℃灭菌15min。考察两种灭菌条件下成品的情况。结果见表4。

从上述实验结果看，121℃、15min下，样品的含量略有下降，有关物质增加较大，且有大部分已超过限度。115℃、30min灭菌条件与半成品相比，pH值、含量及有关物质变化均不大。故选择115℃、30min为最终的灭菌温度。

3 制备样品初步稳定性分析

通过上述筛选，最佳处方关键控制点定位活性炭用量为0.3%，pH值为5.4～6.0，灭菌参数为115℃、30min，配制及灌装过程全程充氮，以该处方制备的样品置于加速条件温度(40±2)℃、相对湿度(75±5)%及长期条件温度(25±2)℃、相对湿度(60±10)%进行初步稳定性考察。结果见表5、表6。

表4 灭菌温度选择

表5 加速试验结果

表6 长期试验结果

从以上实验结果可以看出该产品在加速6个月内、长期12个月内pH值、性状、有关物质及含量均符合规定，表明该产品质量较稳定。

4 讨论

从氮气处方筛选结果看，氮气对产品质量影响较大，因此为保证产品质量，实际生产时配制及灌装过程要全程充氮。从pH值、活性炭及灭菌参数筛选结果看，pH值定在5.4～6.0，活性炭用量为0.05%，灭菌参数为115℃、30min，生产出来的样品已知杂质环-(L-丙氨酰-L-谷氨酰)均小于0.05%，且样品较稳定，工艺可行。

[1] 刘敬臣，王海棠，王维.丙氨酰—谷氨酰胺对脓毒症大鼠肺损伤的保护作用[J].中南大学学报：医学版,2008,33(12)：1095-1100.

[2] 孙忠民，杨岚，于楠等.丙氨酰—谷氨酰胺在有创机械通气时防治肠功能衰竭的作用[J].中国医师进修杂志,2007,30(11)：53-54.

[3] 杨清茹，张敬浩等.丙氨酰—谷氨酰胺对重症肺炎患者肠黏膜及免疫功能的影响[J].中外医学,2013,32(36)：105-108.

(责任编辑：魏 晓)

Alany Glutamine Injection Prescription Screening and Preliminary Stability Study

Xu Zhiwen1,2,Wang Jing2,Liu Xiaojuan3,Chen Xiaoyun4,Ren Zhelin2

(1.Shandong University School of Pharmacy，Jinan 250012，China；2.Chen xin pharmaceutical co.,Ltd.,Jining 272073，China; 3.Shandong Jinig NO.2.People's hospital,Jining 272049，China；4.Jining jinghua eye hospital,Jining 272000，China)

Objective:Screening the preparation technology of Alany glutamine injection through the scientific method and carries on the preliminary stability study.Methods:To determine the best prescription according to the key control point activated carbon dosage,pH value,the sterilization parameters and nitrogen or not and inspection the stability of the samples.Results:the key control point in optimized formula was the following：the activated carbon dosage was 0.05%,the pH value was 5.4～6.0,and the sterilization parameters was 115℃，30min;The samples prepared in this formula were stable in quality in the accelerated,room temperature storage test under the condition of commercial packing.Conclusion:The prescription is reasonable in design and the injection is stable in quality.

Alany Glutamine Injection;Preparation Technology;Stability

2015-07-07

徐志文(1980-)，男，辰欣药业股份有限公司助理工程师，研究方向为制药工程。

R284.1

A

1673-2197(2015)19-0025-03

10.11954/ytctyy.201519011