贾福怀，陶 刚，叶贤祺，王彩霞

(宁波御坊堂生物科技有限公司，浙江 宁波 315012)



复方中药口服液对小鼠抗疲劳作用实验研究

贾福怀，陶 刚*，叶贤祺，王彩霞

(宁波御坊堂生物科技有限公司，浙江 宁波 315012)

目的：观察由黄精、黄芪、西洋参、发酵虫草菌粉(蝙蝠蛾拟青霉菌粉)、马鹿茸为主要原料制备的复方中药口服液对受试小鼠的抗疲劳作用。方法：设低、中、高3个剂量组，经口给予样品，每天1次，连续30天，观察负重游泳时间，进行血清尿素氮测定、肝糖原测定、血乳酸测定。结果：受试物中、高剂量组可明显延长小鼠负重游泳时间(P<0.05)；中、高剂量组可明显降低小鼠运动后血清尿素氮含量(P<0.01)；中、高剂量组可明显降低小鼠游泳后血乳酸含量(P<0.05)，低、中、高剂量组均能明显降低血乳酸曲线下面积(P<0.01)。结论：此复方中药口服液具有明显的抗疲劳作用，且中、高剂量组抗疲劳效果更加明显。

中药口服液；抗疲劳；药理实验

随着生活节奏的加快，越来越多的人在日常生活中处于疲劳状态，近几年甚至出现了因过度疲劳而猝死的事件。据WHO调查，全球有35%以上的人处于疲劳状态，其中中年男性疲劳状态达60%，这个数据依然呈上升趋势[1]。为缓解疲劳，除养成良好作息习惯及适当锻炼以外，最有效的方法就是服用抗疲劳保健食品。为此，我们基于中药抗疲劳理论及机体能量供应理论，研发出一种具有抗疲劳功能的复方中药口服液保健食品。该口服液是以黄精、黄芪、西洋参、发酵虫草菌粉(蝙蝠蛾拟青霉菌粉)、马鹿茸等为主要原辅料，含有黄精多糖、黄芪多糖、虫草多糖、黄芪皂苷、人参皂甙、腺苷等活性成分。研究表明，上述活性成分具有明显的抗疲劳功能[2-12]。为进一步研究复方中药口服液的抗疲劳效果及抗疲劳机理，本研究参考卫生部《保健食品检验与评价技术规范》，综合分析了复方中药口服液对小鼠负重游泳时间、运动前肝糖原含量变化、运动后小鼠血清尿素氮含量、血乳酸含量变化等指标的影响。研究的内容可为复方中药保健食品的研发及多种活性成分协同抗疲劳机理研究提供实验基础和理论依据。

1 材料

1.1 样品

供试复方功能制剂为本公司研发部研制。主要原料为黄精(批号20130815)、黄芪(批号20130815)、西洋参(批号20130815)、发酵虫草菌粉(蝙蝠蛾拟青霉菌粉)(批号20121204)和马鹿茸(批号20130815)，棕色液体，推荐用量为60mL/人/d。

1.2 动物

实验用清洁级雌性ICR小鼠，体重18～22g，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，生产许可证号为SCXK(沪)2012-0002。实验动物饲料由浙江省实验动物中心提供，执行标准为GB 14924.1-2001。实验室环境温度20～24℃，相对湿度40%～70%，实验动物房使用许可证号为SYXK(浙)2008-0106。小鼠试验前在动物房环境中适应3天。

1.3 仪器与试剂

游泳箱、电子天平、铅皮、721分光光度计、离心机、混运器、恒温水浴箱、电热水箱、手术器械等。血清尿素氮测定试剂盒、肝糖原测定试剂盒、血乳酸测定试剂盒(试剂盒由南京建成生物工程研究所生产，批号为20120821)。

2 方法

2.1 剂量选择

将小鼠随机分为4组，每组40只，分别为复方功能口服液低剂量组(0.42mL/kg)、中剂量组(0.83mL/kg)、高剂量组(2.50mL/kg)和阴性对照组(蒸馏水)。低、中、高剂量分别相当于人体推荐量的5倍、10倍、30倍。采取灌胃法，经口给予样品，阴性对照组给予同等容积的蒸馏水，每天1次，连续30天。

2.2 负重游泳试验

按剂量设计连续给药30天，末次给予样品30min后，将小鼠放入水中游泳，水深不低于30cm,水温(25±1.0)℃，鼠尾根部负荷5%体重的铅块，记录小鼠自游泳开始至死亡的时间。

2.3 血清尿素氮测定

按剂量设计连续给药30天，于末次给予样品30min后，将小鼠放入30 ℃水中不负重游泳90min，取出，休息60min后摘眼球采血，离心取血清，按试剂盒使用步骤测小鼠血清中尿素氮含量。

2.4 肝糖原测定

按剂量设计连续给药30天，于末次给予样品30min后，立即处死。精确称取肝脏后按照使用步骤测定肝糖原。

2.5 血液中乳酸含量测定

按剂量设计连续给药30天，于末次给予样品30min后第1次采血，在30℃的水中不负重游泳10min后立即进行第2次采血，休息20min后进行第3次采血。将上述3个时间点的血样，按试剂盒使用步骤测定血乳酸含量，计算血乳酸曲线下面积。

2.6 统计学分析

3 结果

3.1 小鼠负重游泳试验

样品浓缩液对小鼠负重游泳时间影响的试验结果见表1。各剂量组的小鼠负重游泳时间均高于阴性对照组。与对照组相比，高剂量组游泳时间延长28.96%，中剂量组游泳时间延长32.50%，差异具有统计学意义(P<0.05)；低剂量组游泳时间延长22.01%，但与对照组比较无统计学差异。说明中剂量和高剂量的复方中药口服液具有缓解疲劳的作用。

表1 样品浓缩液对小鼠负重游泳时间的影响

注：*表示与阴性对照组相比，P<0.05。

3.2 小鼠运动后血清尿素氮含量测定试验

样品浓缩液对小鼠运动后血清尿素氮含量影响的试验结果见表2。由表2可知，低、中、高剂量组都可以降低小鼠运动后血清尿素氮含量。与阴性对照组相比，高剂量组血清尿素氮含量降低了16.64%，高剂量组血清尿素氮含量降低了15.80%，差异有统计学意义(P<0.05)；低剂量组血清尿素氮含量降低了4.68%，但无显著性差异(P>0.05)。

表2 样品浓缩液对小鼠运动后血清尿素氮含量的影响

注：**表示与阴性对照组相比，P<0.01。

3.3 小鼠肝糖原含量测定试验

样品浓缩液对小鼠肝糖原含量影响的试验结果见表3。由表3可知，各剂量组小鼠的肝糖原含量略低于阴性对照组，但无显著性差异(P>0.05)，说明本中药口服液对肝糖原的储备无促进作用[13]。

表3 样品浓缩液对小鼠肝糖原含量的影响试验

3.4 小鼠运动后血乳酸含量测定试验

浓缩液对小鼠运动后血乳酸含量的影响试验结果见表4。由表4可知，与阴性对照组相比，低、中、高剂量组均能降低小鼠游泳后血乳酸含量，且降低效果随着给药剂量增加有逐渐增强的趋势，但低剂量组无显著性差异，而中、高剂量组血乳酸含量降低有显著性差异(P<0.05)。此外，低、中、高剂量组均能明显降低小鼠血乳酸曲线下面积，3组差异均具有统计学意义(P<0.01)。

4 讨论

运动耐力的提升是提高机体抗疲劳效果最直接的表现，而小鼠负重游泳试验作为反映运动耐力的重要指标，如果结果具有显著性差异，则说明样品具有抗疲劳功能。尿素氮是蛋白质和氨基酸代谢的最终产物，机体在剧烈运动时，蛋白质和氨基酸的分解代谢增强，使血液中尿素氮含量增加而导致疲劳；因此，运动后体内尿素氮含量与耐力运动之间有显著关系，可作为另一个疲劳程度评价指标[14]。乳酸是碳水化合物发生糖酵解的最终产物，而碳水化合物是机体剧烈运动时最主要的能量来源，因此机体剧烈运动后乳酸的含量会增高。由于乳酸的积累是机体产生生理性疲劳的重要原因，所以乳酸含量同样可作为判断疲劳程度的重要指标[15]。本试验结果表明，本研究的复方中药口服液有延长小鼠负重游泳时间，减少血清尿素氮浓度，减少血乳酸曲线下面积的作用，尤其是中、高剂量组效果更为明显。

表4 样品浓缩液对小鼠运动后血乳酸含量的影响试验

注:*表示与阴性对照组相比，P<0.05；**表示与阴性对照组相比，P<0.01。

复方中药口服液的主要原料是黄精、黄芪、西洋参、发酵虫草菌粉(蝙蝠蛾拟青霉菌粉)、马鹿茸，所含的黄精多糖、黄芪多糖、皂苷、腺苷等具有明显的抗疲劳作用。经标志性成分含量测定，复方中药口服液中粗多糖含量为12.530mg/mL，总皂苷含量为1.720mg/mL，腺苷含量为0.059mg/mL。经过小鼠抗疲劳功能试验发现，试验组和对照组的肝糖原含量变化差异不大，说明本复方中药口服液不是通过促进肝糖原的储备来提高机体抗疲劳能力。而血清尿素氮浓度明显降低，说明本复方中药口服液可拟制疲劳小鼠血清尿素氮的产生。尿素氮含量的降低表明机体运动过程中蛋白质参与供能比例减少，脂肪和糖原的供能比例相对增加，因此其抗疲劳机理可能是在机体运动供能过程中拟制氨基酸、蛋白质的代谢，而促进糖原、脂肪在运动中的供能。此外，血乳酸含量测定试验显示，血乳酸曲线面积明显降低，说明本复方中药口服液可加速乳酸的清除来降低机体疲劳感，而且，小鼠运动后的血乳酸含量也明显降低，说明本口服液除加速乳酸的清除以外，还可能通过拟制乳酸来达到机体抗疲劳的目的。

本试验经口给予小鼠不同剂量的复方中药口服液，结果表明受试物中、高剂量组均能明显延长小鼠负重游泳时间，差异具有显著性(P<0.05)；中、高剂量组均能明显降低小鼠运动后血清尿素氮含量，差异具有显著性(P<0.01)；中、高剂量组均能明显降低小鼠游泳后血乳酸含量；低、中、高三剂量组均能明显降低血乳酸曲线下面积，差异具有显著性(P<0.01)。因此得出供试样品具有缓解体力疲劳的作用，可以作为保健食品开发利用。

[1] 张颖捷,杜万红. 国内外抗疲劳研究进展[J]. 实用预防医学, 2012(7):1112-1116.

[2] 石娟,赵煜,雷杨,等. 黄精粗多糖抗疲劳抗氧化作用的研究[J]. 时珍国医国药,2011(6):1409-1410.

[3] 刘诗琼,秦晓群,李世胜. 黄精多糖对小鼠抗疲劳作用的实验研究[J]. 中国当代医药,2009(10):31-35.

[4] 王曦,许晓燕,郑林用,等. 乳酸菌发酵黄芪的抗疲劳保健功能研究[J]. 时珍国医国药,2011(6):1422-1424.

[5] 朱华野,朴龙. 黄芪提取物抗炎、镇痛、耐缺氧及抗疲劳作用的研究[J]. 时珍国医国药,2007(5):1156-1157.

[6] 袁红,张淑芳,贾绍辉,等. 黄芪生物活性及其在保健食品中的应用研究进展[J]. 食品科学,2014(15):330-334.

[7] 许宇辉,梁慧春,温泉,等. 蝙蝠蛾拟青霉菌丝体对小鼠体力疲劳及缺氧的影响[J]. 军事医学,2014(10):784-790.

[8] 贲松彬,张月,孙冬梅,等. 虫草多糖苹果果醋的保健功能评价[J]. 食品科学,2014(7):232-237.

[9] 许宇辉,梁慧春,杨征. 蝙蝠蛾拟青霉菌丝体抗小鼠力竭疲劳作用[J]. 中国药理学与毒理学杂志,2014(3):351-357.

[10] 张睿,赵玉红,王忠政. 鹿茸水提物对小鼠抗疲劳功能的影响[J]. 食品工业科技,2011(4):365-367.

[11] 罗翔丹,潘风光,张铁华,等. 鹿茸多肽对小鼠耐缺氧和抗疲劳能力的影响[J]. 食品科学,2008(4):386-388.

[12] 侯潇,高建,李春雨,等. 马鹿角蛋白酶解物的抗氧化、抗疲劳和免疫活性[J]. 食品科学,2013(9):305-309.

[13] 郑哲君,李晓莉,王朔. 抗疲劳功能食品的研究进展[J]. 食品科技,2006,31(2): 4-7.

[14] 陈玉满,蔡德雷,陈江. 红景天抗疲劳作用研究[J]. 浙江预防医学,2006(4):12-13.

[15] 张颖捷,杜万红. 国内外抗疲劳研究进展[J]. 实用预防医学,2012(7):1112-1116.

(责任编辑：余 婷)

Effects of Oral Liquid of Chinese Tranditional Medicine on Anti-fatigue in Mice

Jia Fuhuai,Tao Gang*,Ye Xianqi,Wang Caixia

(Ningbo Yufangtang biological technology co.,Ltd,Ningbo 315012,China)

Objective:To observe the anti-fatigue effects of the oral liquid of chinese tranditional medicine,some experiments were done in mice. Methods:High,medium and low three dose groups were seted,the samples were administered through the rice mouth,once a day,30 consecutive days.Measured the loaded-swimming time,serum urea nitrogen,hepatic glycogen and blood lactic acid after exercise. Results:The medium and high dose groups can significantly extend the loaded-swimming time(P<0.05),significantly lowered serum urea nitrogen in mice after exercise(P<0.01),obviously decrease blood lactic acid after exercise(P<0.05). the low,medium and high dose groups significantly reduced the curve area of blood lactate(P<0.05).Conclusion:The oral liquid of chinese tranditional medicine have the effects of anti-fatigue. The anti-fatigue effects of medium and high dose groups is more obvious.

Oral Liquid of Chinese Tranditional Medicine;Anti-fatigue；Pharmacological Experiments

2015-05-17

贾福怀(1963-)，男，宁波御坊堂生物科技有限公司高级工程师，研究方向为中药产品开发。

陶刚(1984-)，男，宁波御坊堂生物科技有限公司工程师，研究方向为保健食品开发。

R285.5

A

1673-2197(2015)19-0007-03

10.11954/ytctyy.201519004