王 佳，黄俊卿

(1.武汉大学 基础医学院，湖北 武汉 430071;2.江西医学高等专科学校，江西 上饶 334000)



瑞香素对小鼠胶原诱导性关节炎的抑制作用

王 佳1,2，黄俊卿2

(1.武汉大学 基础医学院，湖北 武汉 430071;2.江西医学高等专科学校，江西 上饶 334000)

目的：研究瑞香素对小鼠胶原诱导性关节炎(CIA)的作用，并初步探讨其作用机制。方法：采用牛Ⅱ型胶原蛋白建立CIA模型，检测小鼠足爪炎症的肿胀度，病理切片HE染色对关节组织进行检查，酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测血清中肿瘤坏死因子-α和白介素-6的水平。结果：瑞香素低、中、高剂量灌胃给药能减轻CIA小鼠关节炎症状，降低血清中肿瘤坏死因子-α和白介素-6的水平；可减轻局部关节炎症状。结论：瑞香素对CIA小鼠具有治疗作用，其作用机制可能与其调节CIA小鼠异常的免疫功能有关。

胶原性关节炎；瑞香素；炎症；抑制；免疫功能

类风湿性关节炎是以慢性、对称性、多滑膜关节炎和关节外病变为主要临床表现，尚未明确病因的全身性炎症性自身免疫炎性疾病[1]。目前，类风湿性关节炎治疗仍以药物为主，但目前常用的西药副作用较强，且多数药物仅对某一症状或某一病理过程有效，有一定局限性。瑞香素主要存在于瑞香科属植物中，又名祖师麻甲素，为中药祖师麻的有效成分之一[2]。本研究利用小鼠胶原诱导性关节炎模型，探究瑞香素对类风湿关节炎的作用及机制。

1 仪器与材料

瑞香素(Daphnetin，DPA纯度>90%，上海一基实业有限公司，批号：20120205)；牛II型胶原(Sigma公司)；BCA蛋白定量试剂盒(Pierce公司)；弗氏不完全佐剂(美国sigma公司)；小鼠TNF-α、IL-6ELISA检测试剂盒(德国Bender公司)；实验动物雄性DBA/1小鼠，6～8周龄，湖南斯莱克景达实验动物有限公司，许可证号：SCXK(湘)2012-0016；倒置显微镜(XSZ-D 重庆光学仪器厂)。

2 方法与结果

2.1 实验分组及给药方案

将小鼠随机分成：正常组、CIA模型组、瑞香素低剂量组(25mg·kg-1)、瑞香素中剂量组(50mg·kg-1)、瑞香素高剂量组(100mg·kg-1)。各组于致炎后第14～28 天灌胃给予与正常组和CIA模型组灌胃等容量的0.5%羧甲基纤维素钠，每天1次。

2.2 小鼠CIA模型的制备与评价[3]

量取200μg牛II胶原，置于0.05mol·L-1醋酸0.1mL中，震荡溶解，再与等体积弗氏佐剂充分混合，于小鼠尾根部皮下注射。致敏初次后第14天，小鼠尾根部皮下同体积注射试剂，每天观察关节情况。正常对照组于同时注射同体积磷酸缓冲盐溶液(PBS)。评价标准：4分：全部足爪肿胀；3分：踝关节以下的足爪肿胀；2分：足趾和趾关节有肿胀；1分：趾关节有红肿；0分：无红肿。

2.3 足爪容积测定及病理检查

足爪仪测定致炎前每只小鼠左后足容积，自第14 天起，每四天测定1次相应足容积，肿胀度=(Vt-Vn)/Vn×100%，Vn指模型前足容积；Vt指模型后足容积。第28 天处死小鼠后，剪取左踝关节制病例切片待查。

2.4 炎性因子的检测

第1次免疫后第28 天麻醉小鼠，采用摘眼球法取血获得血清，并按照相应试剂盒说明操作，测定血清肿瘤坏死因子-α和白介素-6的水平。

2.5

2.5.1 瑞香素对CIA小鼠多发性关节炎指数的影响 瑞香素可以抑制CIA小鼠继发性足肿胀，且抑制程度与剂量成正比，其足爪肿胀度明显轻于模型组，结果见表1。

表1 瑞香素对CIA小鼠多发性关节炎指数的影响

2.5.2 病理切片观察 常规HE染色病理切片显微镜检见图1。正常组：(a)滑膜关节有完整的结构，软骨表面完整；(b)细胞排列很规则。CIA模型组：(c)有滑膜关节结构破坏；(d)关节软骨细胞体积变大；(e)有炎性细胞浸润；(f)纤维组织有增生；(g)形成血管翳；(h)软骨下骨等组织引致骨关节软骨破坏。瑞香素高剂量组：(i)可见滑膜关节结构较完整，关节间隙清晰。

图1 CIA小鼠足关节病理切片(×10)

2.5.3 瑞香素对炎性因子表达的影响 经ELISA法检测，相比于正常组，CIA模型组炎性因子肿瘤坏死因子-α和白介素-6的表达显著增加，瑞香素可剂量依赖性地抑制其表达，结果见表2。

表2 各组小鼠血清炎性因子水平

3 结论

目前，类风湿性关节炎的动物模型主要包括：Ⅱ型胶原诱导的关节炎、佐剂诱导的关节炎及多聚糖蛋白诱导的关节炎等[4]。Ⅱ型胶原诱导的关节炎是一种应用广泛的类风湿性关节炎建模方法，在病理条件下，常作为自身抗原引起自身免疫反应。本实验成功建立了小鼠Ⅱ型胶原诱导的关节炎模型，实验研究发现瑞香素对CIA小鼠具有一定的治疗作用，其作用机制可能与调节CIA小鼠异常的免疫功能有关。

[1] GABRIEL SE.The epidemiology of rheumatoid arthritis[J].Rheum Dis Clin Noah Am,2001,27(9):269-282.

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[3] 李洪忠,万敬员,张力,等.积雪草苷对小鼠胶原诱导性关节炎的抑制作用[J].药学学报,2007,42(7):698-703.

[4] 邹文玮,舒奇,傅颖媛,等.瑞香素毒理学实验研究[J].中成药,2013,35(5):908-910.

(责任编辑：宋勇刚)

2015-04-23

王佳(1984-)，女，武汉大学硕士研究生，江西医学高等专科学校助理实验师，研究方向为药理学。

R285.5

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1673-2197(2015)19-0013-01

10.11954/ytctyy.201519006