肿瘤坏死因子-308G/A多态性与慢性乙型肝炎的相关性分析
2015-04-05曾莉蓉魏新素恩施土家族苗族自治州民族医院湖北恩施445099新疆生产建设兵团第一师医院
曾莉蓉，魏新素(恩施土家族苗族自治州民族医院，湖北恩施445099；新疆生产建设兵团第一师医院)
肿瘤坏死因子-308G/A多态性与慢性乙型肝炎的相关性分析
曾莉蓉1，魏新素2(1恩施土家族苗族自治州民族医院，湖北恩施445099；2新疆生产建设兵团第一师医院)
摘要：目的探讨中国人群肿瘤坏死因子-α(TNF-α)启动子区域-308G/A多态性与慢性乙型肝炎(CHB)发生的关系。方法 以肿瘤坏死因子、多态性、乙型肝炎、慢性乙型感染等为主题词，计算机检索检索万方、维普、中国知网、VIP、MEDILINE、Cochrance Library、Spinger、Embase等数据库，时间自建库以来至2013年3月15日，收集中国人群TNF-α启动区-308G/A位点多态性与CHB相关的病例对照研究。评价纳入研究文献的质量后提取有效数据，采用RevMan软件进行Meta分析，采用Statas 10软件进行漏斗图和Egger′s检验。结果 共纳入研究6项，CHB组632例，健康对照组443例。Meta分析结果显示具有G等位基因的人群CHB危险与具有A等位基因的人群相比有显著差异(OR=1.54,95%CI为1.18～2.01，P=0.001)。基因型GG与(GA+AA)无显著性差异(OR=1.72，95%CI为0.80～3.67，P=0.16)。结论 TNF-α启动子区域-308G/A多态性与CHB发生存在相关性，TNF-α启动子-308位点A等位基因可以保护健康者不受HBV感染。
关键词：病毒感染；乙型肝炎；肿瘤坏死因子；Meta分析
肿瘤坏死因子(TNF)由巨噬细胞、单核细胞、中性粒细胞、T细胞和NK细胞刺激后产生。同时TNF可刺激细胞因子的分泌，增加黏附分子的表达，刺激中性粒细胞，具有介导多向性炎症反应、调节免疫等生物学作用[1]。TNF-α位于人类主要组织相容性复合体III类基因区，研究[2]发现，TNF-α基因启动子区某些位点的单个核苷酸多态性可从转录水平影响TNF的产生。关于TNF-α位点SNP与慢性乙型肝炎(CHB)易感性方面是研究的热点，但TNF-α基因的SNP在不同种族、不同地区间分布差异较大，研究的结果不一致甚至相反。本研究对中国人群TNF-α启动子区域-308位点G/A多态性与CHB的病例对照研究进行Meta分析，评价我国人群中TNF-α基因遗传突变与CHB易感性是否相关，为今后的研究提供参考。
1资料与方法
1.1文献检索方法以肿瘤坏死因子、多态性、乙型肝炎、慢性乙型感染等为主题词，计算机检索万方数据库、维普、中国知网全文数据库(CNKI)、VIP、中国重要会议论文全文数据库和中国学位论文全文数据库。以tumor necrosis factor/TNF, polymorphism, HBV/chronic hepatitis B为主题词，检索MEDILINE、Cochrance Library、Spinger、Embase等英文数据库以中国人群为研究对象的文献。收集国内外公开发表的关于人群肿瘤坏死因子-308G/A基因多态性与慢性乙型肝炎关系的文献。对纳入文献中的参考文献进行手工检索，检索时间从建库至2013年3月。由两名研究者采用统一的数据提取表，对纳入的文献进行文献筛选和资料提取，在数据提取中如有不一致的情况，与第三位研究者一起参照原文讨论后协助解决。而后交叉核对，必要时联系原文献作者，确定实验的具体实施过程。
1.2纳入与排除标准收集有关中国人群TNF-α-308G/A多态性与CHB关系的病例对照研究资料，以CHB为研究病例，以正常健康人为对照(control)，通过分子生物学方法检测TNF-α-308G/A位点基因型的分布和等位基因频率，分析TNF-α-308G/A多态性与CHB的关系的文献。纳入标准：①公开发表的TNF-α基因-308位点G/A多态性与中国人群慢性乙型肝炎相关性的病例-对照研究。语种限于中/英文。②研究对象为中国人，包括港澳台地区，民族不限。③ 研究数据齐全，有基因型在病例组和对照组分布频数，研究方法相似，统计方法应用恰当，数据质量可靠。④独立的研究，同一组资料重复报道者，取资料最完整、样本量较大的文献。⑤对照组基因型分布符合遗传平衡定律(Hrdy-Weinberg, H-W-E)。排除标准：①研究内容不包括TNF-α-308G/A位点的研究。②统计方法不当，数量少、质量差、未提供充足原始数据的文献。③其他不符合Cohrance系统评价标准的文献。
1.3数据提取由两名研究者采用统一的数据提取表，对纳入的文献进行文献筛选和资料提取，在数据提取中如有不一致的情况，与第三位研究者一起参照原文讨论后协助解决。而后交叉核对，必要时联系原文献作者，确定实验的具体实施过程。
1.4统计学方法采用RevMan5.0软件进行Meta分析。对基因型分布行H-W-E遗传平衡检验。使用χ2检验对研究的结果进行异质性检验，根据异质性检验结果，若研究间无统计学异质性采用固定效应模型(Peto Mntel-Haenszel，M-H)进行合并分析；反之，则采用校正后的(Dersimonian-Laird，D-L)随机效应模型进行数据分析。计算OR值及95%CI，采用双侧检验。采用 Stata10.1软件进行发表偏倚检测。P≤0.05为差异具有统计学意义。
2结果
2.1纳入研究的基线特征通过中英文数据库检索到文献36篇，排除综述、研究位点不包括-308、研究对象不符、中英文重复发表及数据不全的文献，筛选出7篇符合标准的文献。经遗传平衡检验，1篇文献研究对象不符合H-W-E分布，最终纳入6篇研究文献[3～8]。CHB的诊断标准依据中以2005年 5月中华医学会肝病学分会、中华医学会感染病学分会关于慢性乙型肝炎防治指南标准执行的有1篇，以2000年中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会联合修订的病毒性肝炎诊断标准4篇，以第5次全国传染病与寄生虫病学术会讨论修订的“病毒性肝炎防治方案”试行标准1篇。以体检者乙肝标记物均阴性为对照组2篇[3, 8]，以健康者或体检者乙肝标记物未说明的文献3篇[4,5,7]，体检者乙肝标记物HBsAb(+)、HBcAb(+)或HBcAb(+)为健康对照组的文献1篇。3篇文献基因多态性的检测方法采用限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)、2篇文献采用序列特异性引物PCR(PCR-SSP或AS-PCR)，1篇文献采用斑点杂交。纳入的6组病例对照研究中累积CHB病例632例，对照组443例。
2.2Meta分析结果各研究结果之间无显著异质性(χ2=10.14，P=0.07)，故采用固定效应模型分析。以G等位基因为非暴露因素，A等位基因为暴露因素，Meta分析结果显示，具有G等位基因的人群慢性乙型肝炎的危险与具有A等位基因的人群相比有差异(OR=1.54，95%CI为1.18～2.01，P=0.001)，AA纯合子基因型发现较少，故将(GA+AA)合并，异质性检验结果表明，各研究结果之间有显著异质性(χ2=18.97，P=0.002)，故采用随机效应模型进行分析。基因型GG与GA+AA(OR=1.72，95%CI为0.80～3.67，P=0.16)无显著性差异。
2.3发表偏倚评价和敏感性分析以各合并OR值除以标准误，与标准误倒数(精确度)做Egger′s回归分析，结果等位基因G与A、基因型GG 与GA+AA间无显著性差异(P>0.05)，但漏斗图显示为非对称的，说明各个研究结果之间有发表偏倚。采用逐一排除法对各个研究进行敏感性分析，排除1篇文献[7]后，消除发表偏倚。合并的OR未见明显改变，说明此次Meta分析结果较可靠。
3讨论
人的TNF-α基因位于染色体 6p21.3，属于TNF超家族，能编码多种功能的促炎细胞因子，主要由巨噬细胞分泌，参与调节机体的多种生物学过程，如细胞增殖、分化、凋亡、脂质代谢等。TNF-α表达水平除与机体本身免疫系统的活化水平有关外，其启动子区基因多态性也可能影响转录活性而使表达水平出现差异[2]。研究[9, 10]表明，TNF-α-308位点G/A的多态性与多种疾病有关。
TNF-α的多态性与HBV感染一直是近年来研究的热点。本研究共纳入6个病例对照研究，累积CHB病例 632例，对照组 443例。此次Meta分析结果表明，TNF-α-308位点G/A多态性与CHB感染明显相关。
关于TNF-α-308位点G/A多态性与CHB易感相关性的研究，国外内学者得出的结论不尽相同[11, 12]。产生差异的原因可能是多方面的：种族人群之间疾病的异质性、样本量的大小、研究对象的选择和遗传模型、年龄性别构成、设计方案、是否具有HBV感染家族史等。纳入文献的研究方法上，均采用了合适的分子生物学方法对基因型进行分析，但个体研究存在差异性，采用PCR-RFLP的大部分个体研究中也存在是否对产物进行测序进行验证的差异。在对Meta分析的总体结果进行分析时，这些混杂因素也是需要考虑的。从本研究纳入文献分析结果看，未发现明显可以分层分析的因素，且纳入研究不多，所以未进一步进行亚组分析。本研究在文献收集、整理和分析过程中制定并实施了严格的标准，Egger′s回归分析提示不存在一定的发表偏倚，可漏斗图显示不对称性，采用逐一排除法进行敏感性分析，结果显示不影响本研究所得出的结论。
目前TNF-α的多态性与HBV感染的Meta分析研究较多。如Zheng等[13]对健康者(包括自发性清除)和CHB进行Meta分析发现，-308A等位基因是CHB感染的保护因素，特别是内蒙古人。Xia等[14]将研究对象限定为CHB和自发性清除者，对其进行Meta分析，发现TNF-α-308A具有抗病毒机制。我们将研究对象限定为中国人群CHB和健康体检者，虽然研究样本量小，但具有更高的特异性，会使结果更可靠。结果发现TNF-α-308位点A可以保护健康者不受HBV 感染。TNF-α-308A等位基因对病毒的清除功能很可能和提高TNF-α转录激活和产生有关。
总之，本研究通过对中国人群TNF-α-308位点与CHB易感性进行Meta分析，结果表明TNF-α-308位点多态性与CHB易感性明显相关。由于纳入研究的例数有限，结果尚需在中国人群中进行严格设计、最大程度控制混杂因素、大样本、同质性的病例对照或前瞻性研究加以验证，同时也要充分考虑基因与基因、基因与环境等相互作用的影响，以便更好地阐明TNF-α多态性与CHB的关系。
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(收稿日期：2014-09-11)
中图分类号：R512.62
文献标志码：B
文章编号：1002-266X(2015)03-0055-03
doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.03.021
