裴纪文

西安市中医医院 (西安 710021)

三乌丸的毒理研究*

裴纪文

西安市中医医院 (西安 710021)

目的：观测小鼠分别口服大剂量三乌丸的半数致死量，以评价其安全性。方法：在死亡率0 %(Dn) 和100 %(Dm) 范围内确定5个给药剂量，每个剂量组用10 只小鼠，观察14d，用Bliss 法计算出半数致死量(LD50) 等数据。结果：三乌丸小鼠灌胃给药测得LD50为5.12±0.4232g /kg。结论：三乌丸的治疗量没有发生任何毒性反应，是非常安全可行的。

三乌丸是陕西省中医界老前辈裴一民先生缓解疼痛的有效口服药物，其经历了2～3代人的临床实践，有很好的疼痛缓解率。组方仅有三味药，其中两味药有一定毒性，但经过独特的工艺加工后，毒性大大减少，对药效学无任何影响。由于其独特的组方，有必要对三乌丸毒理学(急性毒性试验)进行研究，为临床安全用药提供依据。本实验,24h内给药1次，观察小鼠接受过量的三乌丸所产生的急性中毒反应，一日灌胃后产生的急性毒性反应和死亡情况。分析毒性作用的靶器官、分析人体过量时可能出现的毒性反应、临床的剂量选择和观察指标的设计提供参考信息等。

1 试验条件

1.1 动物品系 昆明种小鼠体重18～22g，♀♂各半，由西安交通大学医学院实验动物中心提供，许可证号：SCXK(陕)2007-001。实验前适应性喂养，选行为活动、饮食、精神状况正常的小鼠进行实验。

1.2 饲养管理 室温20℃～24℃，相对湿度40%～70%，室温20℃～24℃，光照8h/d，排风扇通风2次/d，每次1h，♀♂分笼饲养，正常颗粒料饲养，水(自来水)自由摄取。

1.3 受试药物 三乌丸(每丸0.15g )批号：20080808西安市中医医院，用药量是以成人用量：每日两次，每次1～2丸。体重按60 kg计，每公斤体重每日服药量为0.01g。

2 试验方法

2.1预试验：

2.1.1 摸索上下限：即用5组动物(每组4只)逐步摸索出使全部动物死亡的最小剂量(Dm)和一个动物也不死亡的最大剂量(Dn)。找出Dm =100%为8.0/kg和 Dn =0% 的剂量3.276g/kg，此两量分别为上下限。

2.1.2 确定组数，组距及各组剂量:①组数：预试验100%(Dm)为8.0g/kg和0%(Dn)的剂量3.276g/kg)，设定5组。②确定组距：组距0.8。

2.1.3 配制等比药液，实验前用蒸馏水配成所需浓度，并使每只动物在给药容量上相等(0.4mL/10g )。

2.2 LD50试验 取小鼠50只，♀♂各半，体重18～22g，给药前禁食12h，将每只小鼠称重标记，随机分为5组。根据预试验所得结果，确定组间三乌丸药物剂量比值为0.80，三乌丸各剂量组剂量分别为8.0、6.4、5.12、4.096、3.276g/kg，1次灌胃给药，给药体积40mL/kg，连续观察二周，给药后按表1观察14d内动物的一般活动情况及存活情况，并详细记录小鼠行为活动、状态、饮食、大小便及毛色、分泌物和死亡数目、死亡时间及主要毒性反应。

3 结 果 小鼠给药后自发活动减少、倦卧不动、嗜睡，动物皮毛光泽，无震颤、惊厥、运动失调、流涎、流泪、流鼻涕、呼吸困难等现象发生。小鼠灌服三乌丸后半h开始死亡。无论高剂量组存活小鼠或死亡小鼠，大多有活动减少、嗜睡、抽搐等临床表现，其中以死亡小鼠表现得更突出(90%)以上。死后立即解剖肉眼可见小鼠胃充盈，肠管胀气，余未见异常。未死动物给药14d后逐只处死解剖，肉眼观察心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、卵巢、子宫、精囊、前列腺、睾丸、胃、肠及胸腔、腹腔等重要脏器、器官未见颜色、形态异常，没有出血点或其它病理改变，胃粘膜颜色红润，无出血点或溃疡，尸检无异常。结果如下：

3.1 三乌丸不同剂量组小鼠死亡情况 见表1。

3.2 三乌丸灌胃小鼠半数致死量LD50见表2。

4 试验结论 实验完毕，按Bliss's 法统计各组死亡鼠数和计算死亡率，从表1、表2可见，三乌丸三乌丸灌胃给药在ICR小鼠测得LD50为5.12±0.4232g/kg，95%可信区间为 5.5606～4.7143 g/ kg。这个半数致死量是人用药量的1024倍；人用量654倍时，动物是没有死亡的，实验足以说明现在人的用量是非常安全的。

表1 三乌丸不同剂量组小鼠死亡率

表2 三乌丸小鼠半数致死量LD50 ( Bliss's 法 )

5 讨 论 三乌丸是生草乌、生川乌及大枣制成的丸剂 ( 0.15g /丸 )，具有祛风除湿,温经止痛的作用。用量很小，每次1～2丸,一日 2次 。在临床上是纯中药、强效止痛剂。组方简单，仅有三味药,三药作用祛邪而不伤正,镇痛而无毒性[1]。我们传统的研究表明[2]：川乌是通过不同炮制方法达到减毒的作用，主要炮制方法有蒸法和煮法，这些炮制法表明微生物发酵有助于降低川乌中毒性生物碱的含量,动物实验表明[3]炮制后乌头毒性降低,但药效镇痛作用减弱。而这项课题研究也说明：生乌头的毒性并不是不可改变的，本课题通过实验观察三乌丸毒性是通过大枣的特殊工艺加工后，药物的毒性大大减低，几乎可以忽略不计，临床应用非常安全可靠，也许这个办法不失为又一种乌头的减毒妙法。三乌丸的临床观察也说明，镇痛作用非常强大，小剂量就能起到很好的缓解疼痛，说明这种方法在大大减轻毒性的同时并没有影响到临床药效。生川乌、生草乌在临床上很少用于口服，主要是畏惧其毒性作用，三乌丸的毒理学研究表明，我们现在给人的用量非常安全，并且有很大的用量调整区间；其毒性是可控的，方法也是多样的，也为临床工作者的进一步研究提供帮助。

[1] 裴纪文，职利琴.三乌丸治疗类风湿性关节炎 226例[J].陕西中医,2008，29(11)：1489.

[2] 曹国琼，张永萍.乌头的药理与毒理作用及减毒的研究进展[J].贵州农业科学，2013,41(2)：61-69.

[3] 刘强强,郭海东.川乌毒理作用研究进展[J].中国中医药信息杂志,2012,19 ( 8 ) ：110-112.

(收稿2015-05-15；修回2015-06-16)

The toxicological study of San-wu pill

Xi’an Chinese Medicine Hospital ( Xi’an710002)

Pei Jiwen

Objective：Observed the median lethal dose of San-wu pill in mouse,to evaluate its safety.Methods：In the mortality rate of 0% (Dn) and 100% (Dm) within the scope of five give medicine doses were determined,each dose group including 10 mouses,observing 14 days,by Bliss method to calculate the median lethal dose (LD50) and other data.Results：The dose of Sanwu pill to fill the stomach to measure LD50 of mouse was 5.12 ±0.4232 g/kg.Conclusions：The treatment dose of Sanwu pill was without any toxic effects,and it is very safe and feasible.

Sanwu pill Acute toxicity Median lethal dose Animal,experiment Mice

*陕西省科学技术厅社会发展攻关计划项目(S2009SF60)

三乌丸 急性毒性 半数致死量 动物,实验 小鼠

R99

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.10.090