赵洪庆, 贺香嫦， 林建忠， 周延彪， 许光明

(1. 湖南中医药大学 药学院 湖南省教育厅中药现代化重点实验室， 长沙 410208；2. 湖南大学 生物学院， 长沙 410000)

反相HPLC法研究影响水稻维生素C含量的关键基因

赵洪庆1, 贺香嫦1， 林建忠2， 周延彪2， 许光明1

(1. 湖南中医药大学 药学院 湖南省教育厅中药现代化重点实验室， 长沙 410208；2. 湖南大学 生物学院， 长沙 410000)

HPLC测定水稻叶中维生素 C (Vc)含量的测定方法，测定后比较转基因水稻叶与普通水稻叶中Vc含量的差异，为寻找调控水稻中Vc含量的关键基因奠定基础。草酸水溶液提取水稻叶中的Vc后，反相HPLC方法测定含量，选用的色谱柱为Diamonsil C18柱(250×4.6 mm,5 μm)，流动相为0.2%磷酸-甲醇，梯度洗脱，检测波长245 nm,柱温30℃。测的线性范围为 1～40 μg/mL(r=0.9992)，平均回收率为98.51%，转基因水稻叶组含量为(0.356±0.009)和(0.444±0.008) mg/g，而普通组Vc含量为(0.554±0.013) mg/g，统计软件SPSS19.0分析表明二者有显著差异(P<0.01) 。此方法测水稻叶中Vc含量具有简便，快速，准确的特点；类受体蛋白激酶439即为影响水稻中Vc含量的关键基因。

转基因；水稻叶中的Vc；HPLC；类受体蛋白439

维生素C(Vc)是一种重要的植物衍生的抗氧化剂，并且是构成膳食Vc的主要来源。Vc对动植物的成长、应激反应起着重要的作用[1]。 Wheeler等提出的L-半乳糖途径被公认为高等植物中合成ASA的主要途径[2]。在拟南芥中，有9种酶被证明直接参与Vc的生物合成[ 3-8], 据文献报道[2]，CSN5B(COP9信号亚基5B)能降解VTC1(Vc合成酶)，影响Vc的含量。而我们所研究的类受体蛋白激酶439，通过酵母双杂交实验，验证能与CSN5B相互作用，预测蛋白激酶439是CSN5B的上游基因，可通过调控CSN5B来影响水稻中Vc含量。类受体蛋白激酶(RLK)是一类定位在质膜上，包含胞外结构域、跨膜结构域和胞内激酶域的膜蛋白。因为这类蛋白激酶的分子结构和功能类似动物细胞中的受体蛋白激酶(RPK)[9-12]，并且绝大多数尚未鉴定出其配基，故称为类受体蛋白激酶。……