刘 普， 胡家勇， 何 蓉， 朱立武

(安徽农业大学 园艺学院果树学重点实验室， 合肥 230036)

猕猴桃溃疡病菌漆酶基因的克隆与功能分析

刘 普， 胡家勇， 何 蓉， 朱立武

(安徽农业大学 园艺学院果树学重点实验室， 合肥 230036)

为探明猕猴桃溃疡病病菌漆酶基因的序列特征与功能，研究从12株溃疡病病菌丁香假单孢杆菌猕猴桃致病变种(Pseudomonassyringaepv.actinidae)中扩增获得漆酶基因，分别命名为PsalacJF、PsalacHY、PsalacGC、PsalacHWD、PsalacINS、Psalac7285、PsalacLT12、PsalacLT16、PsalacLT26、Psalac349、PsalacKw30和PsalacK3。序列分析结果显示上述序列之间只有少许核酸位点有差异，基因编码全长都为1374 bp，BLAST预测基因编码有457个氨基酸序列(包括N-端20个氨基酸的信号肽)，启动子位于基因上游175 bp。生物信息学分析发现该基因具有漆酶特有的4个Cu2+活性位点，且活性位点高度保守。系统进化分析结果显示该基因编码序列与多种细菌的漆酶基因同源关系很近，其中与P.fluorescensPf0-1的同源性最高。研究结果表明溃疡病病菌中普遍含有具备细菌漆酶基因家族的序列特性，推测该基因可能参与调控溃疡病病菌致病性和Cu2+耐受性。

猕猴桃；溃疡病；漆酶

猕猴桃溃疡病是一种毁灭性病害，由丁香假单孢杆菌猕猴桃致病变种(Pseudomonassyringaepv.actinidae, Psa)引起，主要危害猕猴桃的主干、枝干和叶片。在枝干上表现为病部溢出大量初为乳白色、后变红褐色的粘液，随后上部枝条萎蔫死亡。在叶片上则表现为产生中间为褐色、边缘为黄色晕圈的近圆形病斑[1]。

近年研究发现，世界猕猴桃Psa存在4种不同的致病基因型(Genotype)，即Psa-J(含有编码菜豆毒素基因簇)，Psa-K(含有编码冠菌素基因簇)，Psa-V(缺乏编码菜豆毒素和冠菌素基因簇)和Psa-LV(缺少部分effector基因簇)[2-3]，不同基因型菌株存在着明显的致病差异。……