黄 瑛 卿朝辉 罗卫芳 蒋淑明 潘慧宜 鲁 义 尧新华 马万里

(广州市中医医院 1皮肤科；2麻醉科，广东 广州 510130)

·论著·

甘草酸苷对银屑病大鼠的作用

黄 瑛1卿朝辉2罗卫芳2蒋淑明1潘慧宜1鲁 义2尧新华2马万里1

(广州市中医医院1皮肤科；2麻醉科，广东 广州 510130)

目的:观察甘草酸苷对银屑病大鼠的作用，探讨其可能的作用机制。方法：健康雌性SD大鼠，体质量180～210 g，腹腔注射苯甲酸雌二醇，形成雌激素期阴道上皮银屑病模型。将40只模型大鼠随机分成4组(n=10)：对照组、甘草酸苷1 mg组、甘草酸苷2 mg组和甘草酸苷4 mg组。上述4组分别于大鼠腹腔注入生理盐水、甘草酸苷1、2和4 mg。用光学显微镜观察大鼠阴道上皮基底细胞有丝分裂情况,计数300个基底细胞中的有丝分裂数，计算有丝分裂指数。用酶联免疫吸附试验法测定大鼠血清细胞因子IL-4和IL-10的含量。结果：甘草酸苷1 mg组、甘草酸苷2 mg组和甘草酸苷4 mg组的有丝分裂指数均明显低于对照组(P<0.05)，IL-4和IL-10 的含量均明显高于对照组(P<0.05)。结论：甘草酸苷具有抑制银屑病大鼠阴道上皮细胞有丝分裂的作用，其作用可能与血清细胞因子IL-4和IL-10的含量增高有关。

甘草酸苷；银屑病；有丝分裂指数；细胞因子

银屑病又称“牛皮癣”，是一种临床特点为红斑、丘疹、覆盖有不等鳞屑、病程漫长、反复发作的迁延性皮肤病[1]。临床上甘草酸苷治疗银屑病，疗效确切且广泛应用，但具体作用机制尚未明确[2]。本研究拟建立大鼠银屑病模型，观察甘草酸苷对银屑病大鼠的作用，探讨其可能的作用机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物

健康雌性SD大鼠，体质量180～210 g，7～9周龄，由中山大学疼痛研究中心提供。实验期间在标准条件下[室内亮度每12 h明/暗循环，室温(22±1)℃]，自由摄取水和食物。

1.2 实验方法

1.2.1 实验动物模型的建立 实验大鼠每10 g体质量腹腔注射苯甲酸雌二醇注射液0.2 mg，每日1次，连续3 d，使大鼠处于雌激素期，形成雌激素期阴道上皮银屑病模型，2 d后，用于下一步实验。模型鼠与正常鼠比较，大鼠阴道上皮细胞有丝分裂指数差异有统计学意义(P<0.05)，表明造模成功。

1.2.2 实验动物分组 将40只模型大鼠随机分成4组(n=10):对照组、甘草酸苷1mg组、甘草酸苷2 mg组和甘草酸苷4 mg组。

1.2.3 药物实验 实验药物：对照组(生理盐水)、甘草酸苷1 mg组(甘草酸苷1 mg，山东瑞阳制药有限公司，批号14012406)、甘草酸苷2 mg组(甘草酸苷2 mg)、甘草酸苷4 mg组(甘草酸苷4 mg)。各组药物均用生理盐水溶解，配成2 mL溶液分别注入大鼠腹腔，每天1次，共14 d。

1.2.4 计数有丝分裂数和计算有丝分裂指数 药物实验完成末次给药2 h后，大鼠腹腔注射秋水仙碱2 mg/kg，使细胞有丝分裂周期停滞于有丝分裂中期，便于计数。6 h后颈椎脱位处死大鼠，取其阴道组织用10%甲醛溶液固定，石蜡包埋，HE染色，用光学显微镜观察大鼠阴道上皮基底细胞有丝分裂情况,计数300个基底细胞中的有丝分裂数[3]。有丝分裂指数即为每100个基底细胞中的有丝分裂数。

1.2.5 测定血清细胞因子IL-4和IL-10的含量 药物实验完成后，取大鼠血约4 mL，采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)，测定血清细胞因子IL-4和IL-10的含量，具体按照 ELISA 试剂盒操作说明完成。

1.3 统计学分析

2 结 果

2.1 有丝分裂指数的比较

甘草酸苷1 mg组、甘草酸苷2 mg组和甘草酸苷4 mg组的有丝分裂指数均低于对照组，且差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。各实验组组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。

表1 4组有丝分裂指数的比较

注：与对照组比较，*P<0.05

2.2 IL-4和IL-10含量的比较

甘草酸苷1 mg组、甘草酸苷2 mg组和甘草酸苷4 mg组的IL-4和IL-10 含量均高于对照组，且差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 4组IL-4和IL-10含量的比较

注：与对照组比较，*P<0.05

3 讨 论

现代医学研究认为银屑病与遗传、感染、代谢障碍、内分泌失调、神经精神因素及免疫紊乱等多方面因素有关[4]。近年来研究还发现，银屑病是与免疫学密切相关的疾病，包括细胞因子、黏附分子、各种免疫细胞等多种因素都介入了银屑病的病理生理过程[5,6]。但由于银屑病的确切病因与发病机制尚未完全清楚,故难治易发。

甘草酸苷由1分子的甘草次酸和两分子的葡萄糖醛酸组成，具有抗炎、抗变态反应、类激素样作用，并具有免疫调节、抑制病毒增殖及保护肝细胞膜的作用[7]。甘草酸苷免疫调节作用表现在对免疫活性细胞、细胞因子、补体等多方面。近年来，甘草酸苷已用于多种皮肤疾病的治疗，尤其是与免疫功能异常有关的疾病包括银屑病。甘草酸苷治疗银屑病目前仅停留在临床观察和传统的临床验案阶段，没有涉及到作用机制的研究，因此，探讨作用机制成为本研究的主要任务。

人类银屑病表皮的组织病理学主要特点包括增生过快和角化不全两方面。大鼠雌激素期阴道上皮增生活跃,有丝分裂增多,细胞转换加快，模拟了人类银屑病表皮增生过快的特点，比较大鼠雌激素期阴道上皮基底细胞有丝分裂指数，可较好地评价药物抑制细胞有丝分裂作用[3]。因此，本实验动物模型选用大鼠雌激素期阴道上皮模型。

近年有研究表明[8，9]，甘草酸苷并非单纯地影响某一种或几种细胞因子的升高或降低,而是可以打破机体Th1和Th2类细胞因子的失衡状态,对于机体免疫功能失调的修正意义重大。秦小卫等研究也发现，甘草酸苷可抑制斑秃患者Thl型细胞因子表达、下调IFN-γ及TNF-β表达水平，并可上调Th2型细胞因子IL-4及IL-10表达水平[11,12]。本研究结果表明，甘草酸苷1 mg组、甘草酸苷2 mg组和甘草酸苷4mg组的大鼠阴道上皮细胞有丝分裂指数均明显低于对照组，大鼠血清细胞因子IL-4和IL-10 的含量均明显高于对照组，说明甘草酸苷具有抑制银屑病大鼠阴道上皮细胞有丝分裂的作用，其作用可能与血清细胞因子IL-4和IL-10 的含量增高有关。但是，银屑病发病机制较为复杂[13]，涉及到多种细胞因子、趋化因子及炎症介质，甘草酸苷是否同时在其他环节中发挥调节作用，尚有待进一步研究。

[1] 许 文.银屑病患者生活质量的影响因素分析[J].广东医学，2012,33(24):3790-3792.

[2] 魏 群,韩 威,衡 威,等.复方甘草酸苷粉针治疗寻常型银屑病疗效观察[J].实用药物与临床,2010,13(4):304.

[3] 郑海燕，李忻红.中药白疕合剂对实验性银屑病小鼠模型的影响[J].中国中西医结合皮肤性病学杂志,2012,11(3):149-151.

[4] 刘瓦利,何 伟. 银屑病的病因与发病机制[J].中国临床医生，2009,37(8):7-8.

[5] 段行武.中药治疗银屑病的研究进展[J].中国临床医生杂志，2007,35(7):32-35.

[6] 唐 皓,徐 嘉,粱艳冰,等.大鼠细胞因子信号转导抑制因子-1基因的原核克隆表达和免疫学分析[J].中华生物医学工程杂志,2010,16(5):448-452.

[7] 王英杰.复方甘草酸苷的皮肤科临床应用[J]．皮肤病与性病，2011,33(2):87-92.

[8] 陈观尚.复方甘草酸苷治疗慢性乙型肝炎的疗效观察及对IL-8和IL-10的影响[J].广东医学院学报,2010,28(2):143-144.

[9] 王大南,于 淼,冯永辉,等.甘草酸苷调节小鼠腹腔巨噬细胞活性的研究[J].中国免疫学杂志,2009,25(9):805-807.

[10] 秦小卫，陈丽芳. 复方甘草酸苷对斑秃患者外周血单一核细胞中γ干扰素、肿瘤坏死因子β表达的调节作用[J]．中华皮肤科杂志，2011,44(12)：877-879．

[11] 秦小卫，史维平. 复方甘草酸苷对斑秃患者PBMC中IL-4、IL-10表达的调节作用[J]．中国药物与临床,2010,10(5)：554-556.

[12] 李旺林,兰 平,吴小剑,等.多形螺旋线虫对T细胞诱导的小鼠肠炎CD4+T细胞分泌和浸润的影响[J].中华生物医学工程杂志,2011,17(2):101-104.

[13] 夏登梅,郭生红,李 薇.银屑病发病相关免疫机制的研究进展[J]. 皮肤病与性病,2014,36(2):79-82.

(本文编辑:王馨)

Effect of Glycyrrhizin on psoriasis in rats

HuangYing1,QingZhaohui2,LuoWeifang2,JiangShuming1,PanHuiyi1,LuYi2,YaoXinhua2,MaWanli1

(1DepartmentofDermatology,GuangzhouHospitalofTraditionalChineseMedicine,Guangzhou510130;2DepartmentofAnesthesiology,GuangzhouHospitalofTraditionalChineseMedicine,Guangzhou510130,China)

Objective:To determine the effect of Glycyrrhizin on psoriasis rat model of psoriasis, and investigate its possible mechanism. Methods:Healthy female SD rats weighing 180-210 g were given estradiol benzoate by intraperitoneal injection to establish model of psoriasis in vaginal epithelial during the period of estrogen secretion. Forty rat models were randomly divided into four groups(n=10):model group, 1mg Glycyrrhizin groupn, 2 mg Glycyrrhizin group and 4 mg Glycyrrhizin. And each group was given normal saline, 1, 2 and 4mg Glycyrrhizin by intraperitoneal injection, respectively. Mitosis in vaginal epithelial basal cells of rats was observed by optical microscope, and the numbers of mitosis in 300 basal cells were counted. And the mitotic index was calculated. The content of IL-4 and IL-10 in rat serum was detected by enzyme-linked immuno sorbent assay (ELISA). Results:Mitotic indexes in 1mg Glycyrrhizin group Glycyrrhizin, 2mg Glycyrrhizin group Glycyrrhizin, and 4mg Glycyrrhizin group Glycyrrhizinwere all significantly lower than that in the model group(P<0.05), whereas the content of IL-4 and IL-10 in the three groups were significantly higher than that in the model group(P<0.05).Conclusion:Glycyrrhizin may exert the effect of inhibition of vaginal epithelial mitosis in rats with psoriasis. And the underlying mechanism may be associated with the increased content of serum IL-4 and IL-10Glycyrrhizin.

Glycyrrhizin; psoriasis; mitotic index; cytokine

10.3969/j.issn.2095-9664.2015.01.006

广东省科技计划项目(02310380218378045)。

黄 瑛(1968-)，女，副主任护师，本科。

R758.6

A

2095-9664(2015)01-0021-03

2014-10-10)

研究方向：皮肤科临床护理。