骆志红,杨华英,孙冬霞,孔卫平

(　1.沧州河间张茜荣诊所,河北 沧州 062450;2.邯郸市中医院妇科，河北 邯郸 056001；

3.邯郸市妇幼保健院病理科，河北 邯郸 056002)



年轻宫颈鳞癌组织中微血管形成及c-Myc和COX-2表达的临床病理研究

骆志红1,杨华英2※,孙冬霞3,孔卫平3

(1.沧州河间张茜荣诊所,河北 沧州 062450;2.邯郸市中医院妇科，河北 邯郸 056001；

3.邯郸市妇幼保健院病理科，河北 邯郸 056002)

doi：10.3969/j.issn.1006-2084.2015.05.055

宫颈鳞癌(squamous carcinoma of cervix,SCC)是仅次于乳腺癌的第二大危害女性健康的肿瘤[1]，宫颈细胞学筛查的普遍应用使SCC得以早期发现和治疗，其发病率和病死率有所下降，随着当今社会性开放程度加剧，SCC发病年龄有年轻化趋势，严重威胁年轻女性的健康，对年轻化SCC应引起社会警惕。针对SCC年轻患者，其术后复发、转移等仍是治疗的难题，随着分子生物学的发展，人们认识到肿瘤的发展、转移与基因异常有密切关系，可以认为肿瘤就是基因的疾病。本研究采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结(streptavidin-perosidase，SP)法检测40例SCC中原癌基因(c-Myc)和环加氧酶2(cyclo-oxygenase-2,COX-2)表达及微血管密度(microvessel density,MVD)值情况，分析并探讨两者在其发生、发展和转移中的作用,为临床治疗提供帮助。

1材料与方法

1.1材料将2007年1月至2011年12月邯郸市妇幼保健院和邯郸市中医院手术切除的SCC组织标本398份中选取40例作为SCC组，患者年龄20~25岁，平均(29.5±1.5)岁；术前均未行放、化疗及激素治疗。病理分期为Ⅰ期24例、Ⅱ期16例；肿瘤组织为高分化19例、中分化12例、低分化9例；有淋巴转移18例，无淋巴结转移22例。同时选取门诊就诊并行宫颈锥形切除术的宫颈上皮内瘤样病变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)标本31份，作为CIN组，患者年龄20~25岁，平均(31.4±1.7)岁。另选因子宫肌瘤或子宫脱垂而行手术切除子宫的正常宫颈组织(normal cervical endotheliment,NCE)标本10份作为NCE组，患者年龄20~25岁，平均(33.0±1.6)岁。

1.2c-Myc和COX-2表达检测采用SP免疫组织化学法，按试剂盒说明书操作，取已知乳腺癌组织切片作为阳性对照，以磷酸盐缓冲液代替一抗作为阴性对照。常规免疫组织化学SP试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司生产，批号：20120708996)，鼠抗人c-Myc单克隆抗体和鼠抗人COX-2单克隆抗体均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。每张切片均随机观察5个高倍视野(×400)，阳性细胞数<5%为(-)，5%～25%为(+)，>25%～50%为(++)，>50%为(+++)。以+～+++为阳性表达。MVD值(CD34标记)计数标准:按照Wei-dner等[1]的评判方法，在低倍(×100)视野下找到癌组织间质微血管密集部位，换到高倍(×400)视野下计数5个视野的微血管数，取其平均值为MVD值。

2结果

2.1c-Myc和COX-2的表达及MVD的变化3组中c-Myc与COX-2的阳性表达物质主要定位于细胞质，呈棕黄色颗粒，见图1、图2(封三)。SCC组的c-Myc和COX-2表达高于CIN组和NCE组，CIN组COX-2的表达高于NCE组(P<0.05)；SCC组MVD高于CIN组和NCE组(P<0.05)。见表1。

表1　各组c-Myc、COX-2和MVD比较

c-Myc：源癌基因；COX-2：环加氧酶2；MVP：微血管密度；a与NCE组比较，P<0.05；b与CIN组比较，P<0.05；△：χ2值，*：F值

2.2c-Myc和COX-2阳性表达与宫颈癌临床病理参数的表达情况在宫颈癌组织中，c-Myc的阳性表达与组织学分化程度和是否有淋巴结转移有关，随着组织异型程度增高，分化水平降低，c-Myc阳性表达越强。COX-2阳性表达与宫颈癌临床病理分期和淋巴结转移有关，亦随着临床病理分期的增高和伴有淋巴结转移，COX-2阳性表达也增强，见表2。

表2　c-Myc和COX-2阳性表达与宫颈癌

c-Myc：原癌基因；COX-2：环加氧酶2

2.3SCC组中c-Myc蛋白阳性表达组与阴性表达组MVD的差异SCC组中c-Myc蛋白阴性表达的MVD值为13.27±5.43，低于c-Myc蛋白阳性表达的MVD值为28.46±9.73，差异有统计学意义(t=3.994，P<0.01)。

2.4SCC组中COX-2蛋白阳性表达组与阴性表达组MVD的差异SCC组中COX-2蛋白阴性表达的MVD值为16.26±7.37，低于COX-2蛋白阳性表达的MVD值为37.43±9.47，差异有统计学意义(t=4.672，P<0.01)。

2.5COX-2和c-Myc在SCC中相关性分析在SCC组中，COX-2和c-Myc阳性表达呈显著正相关(χ2=3.350,P=0.067,r=0.345，P=0.029)，见表3。

表3　COX-2和c-Myc在SCC中相关性分析　(例)

COX-2：环加氧酶2;c-Myc：原癌基因；SCC:宫颈鳞癌

3讨论

宫颈癌作为最常见的妇科恶性肿瘤之一，危害女性患者的身心健康，有资料显示宫颈癌患者已出现年轻化的趋势[2]，其原因可能与性生活开始年龄提前、年轻女性吸烟者增多有关[3]。SCC占宫颈癌的80%～85%，本研究将20~35岁的年轻SCC患者作为研究对象，通过检测其组织内c-Myc和COX-2的表达情况及MVD，进行分析研究。

c-Myc是1977年被发现的一种具有恶性转化作用的癌基因，这种基因蛋白在细胞的增殖分化和细胞凋亡中起重要调控作用[4]，这些调控作用主要是通过调节细胞周期G1～S期来完成的，在恶性肿瘤组织中检测c-Myc的表达水平明显升高，促进G1期快速进入S期，引起细胞增殖、恶性转化。另外通过对小鼠研究发现c-Myc不仅参与细胞的生长、增殖和细胞的分化等正常生理活动，可引起组织过早地形成血管，并且有c-Myc活化的细胞在恶变成癌时，能更早形成血管及发生转移[5]。许多研究表明，在大肠癌、乳腺癌、小细胞肺癌[6-8]等能检测到c-Myc表达增加、失调，并且通常与癌肿的侵袭性有着密切相关。相关研究证实，在SCC组织中c-Myc蛋白及信使RNA水平过度表达[9]，但是在国内c-Myc在年轻SCC组织中的报道研究少见，本研究重点关注c-Myc在年轻SCC组织中表达情况及MVD，研究表明癌基因C-Myc在NCE、CIN和SCC中的表达情况随着病情的进展而升高，c-Myc在年轻SCC组织中的表达随组织学分化程度增高，表达率增高，与组织学分化程度和是否淋巴结转移有显著相关性, 并且c-Myc表达阳性在有淋巴结转移的MVD显著高于无淋巴结转移组(P<0.05)，随着SCC分化程度的改变MVD也明显不同(P<0.05)，说明c-Myc在SCC发展过程中表达逐渐增高，破坏宫颈组织的基膜，促进肿瘤细胞的浸润，MVD值增高，新生大量微血管，为肿瘤细胞提供养分，参与肿瘤细胞的浸润转移,证实c-Myc蛋白的高表达可以继续促使肿瘤进一步发展。

作为限速酶的一种COX广泛存在于人体的各种组织细胞中，COX常见的异构酶包括COX-1和COX-2，其中COX-2在致瘤因素的刺激作用下可以表达，有学者研究发现，COX-2在大多数人类肿瘤组织细胞中明显表达上调，通过刺激肿瘤细胞增殖和生长、抑制细胞凋亡、增加肿瘤细胞侵袭力在肿瘤组织中发挥作用[10]。另外有研究发现，COX-2对血管内皮生长因子的表达有上调作用，有可能促进肿瘤组织生长和肿瘤血管的形成[11]。此外，本研究结果显示，从NCE组、CIN组、SCC组， COX-2蛋白表达逐渐增强(P<0.05)。在年轻SCC组中COX-2蛋白的表达与临床分期和淋巴结转移有关(P<0.05)，提示COX-2蛋白高表达可以促使年轻SCC进展，发生转移，其作用机制可能通过COX-2蛋白调节促进增殖、抑制凋亡和促进微血管形成等方面参与肿瘤转移的各个环节。

对于c-Myc和COX-2在年轻SCC组织中的相关性分析发现，两者呈明显正相关(P<0.05)，c-Myc作为Wnt通路中β联蛋白下游的靶基因对肿瘤细胞增殖分化和凋亡进行调节，COX-2也可以通过β联蛋白调节表达[12]，两者共同作用于细胞周期，说明在细胞的增殖、分化及凋亡方面存在共同作用。总之，在40例年轻SCC组中c-Myc和COX-2处于过表达状态，通过检测两者的表达情况有助于年轻女性SCC的诊断及病情判断提供一定参考依据，但由于本次研究标本量不足，以上结论尚需要进一步扩大标本量进行验证。

参考文献

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摘要：目的研究原癌基因(c-Myc)和环加氧酶2(COX-2)在宫颈上皮内瘤样病变(CIN)和宫颈鳞癌(SCC)中的表达及与微血管密度(MVD)的相关性，探讨c-Myc和COX-2在SCC发生、发展中的相互关系及其表达与临床病理联系。方法选择2007年1月至2011年12月邯郸市妇幼保健院和邯郸市中医院手术切除的SCC组织标本40份、CIN标本31份，正常宫颈组织(NCE)10份，采用免疫组织化学SP法检测各组c-Myc和COX-2的表达情况和微血管密度(MVD)(CD34标记)。分析两者在SCC组中的阳性表达情况及与肿瘤分期早晚、病理分型高低、淋巴结转移等病理指标之间的相互关系。结果c-Myc在SCC组中的阴性表达率为62.5%(25/40),显著高于CIN组和NCE组(P<0.01),在SCC组中c-Myc的表达与分化及淋巴结转移有关(P<0.01)。在SCC组中，COX-2阳性表达率为67.5%(27/40),显著高于CIN组和NCE组(P<0.01),COX-2的表达与SCC的临床病理分期及淋巴结转移有关(P<0.01)。相关性分析表明两者在SCC组织中的表达呈正相关，并且两者在宫颈癌血管生成中可能具有协同作用。结论c-Myc和COX-2在年轻SCC发生、发展中起重要作用，c-Myc和COX-2上调表达可作为SCC预后的判断指标。

关键词：子宫内膜肿瘤；原癌基因蛋白；环加氧酶2蛋白；微血管密度；免疫组织化学

Study on the Expression of c-Myc and COX-2 in Cervix Neoplasms of Young Women and Their Correlation with the Formation of MicrovesselsLUOZhi-hong1,YANGHua-ying2,SUNDong-xia3,KONGWei-ping3. (1.CangzhouHejianZhangQianrongClinic,Cangzhou062450,China; 2.DepartmentofGynaecology,HandanHospitalofTraditionalChineseMedicine,Handan056001,China； 3.DepartmentofPathology,HandanMaternalandChildHealthCareHospital,Handan056002,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the expression of COX-2 and c-Myc in cervical intraepithelial neoplasia(CIN) and squamous cell carcinoma(SCC) of young women under 35,and their correlation with microvessel density(MVD),so as to explore the correlation of COX-2 and c-Myc with the incidence and progression of SCC,as well as the correlation of their expression with clinical pathology.MethodsCervical tissue samples of 40 young patients with SCC,samples of 31 young patients with CIN and samples of 10 young patients with normal cervical tissues admitted in Handan Maternal and Child Health Care Hospital and Handan Hospital of Traditional Chinese Medicine were selected as research objects,the expressions of COX-2,c-Myc and microvessel density(MVD) labeled by CD43of all the samples were detected by immunohistochemistry S-P method,and the positive expression status of COX-2 and c-Myc in SCC tissues,as well as their relationship with neoplasm staging,pathological type,and lymph node metastasis were analyzed.ResultsThe positive expression rate of c-Myc in SCC was 62.5%(25/40)，which was significantly higher than that in CIN and normal cervical tissues(P<0.01),the expression of c-Myc was correlated with myometrial invasion and lymph node metastasis(P<0.01).The expression rate of COX-2 in SCC was 67.5%(27/40),which was significantly higher than that in CIN and normal cervical tissues (P<0.01),the expression of COX-2 was correlated with the pathological stage of SCC and lymph node metastasis (P<0.01).It turned out that the expression of COX-2 and c-Myc were positively correlated in SCC,and such expression had synergistic effect on the formation of microvessels in cervical carcinoma.ConclusionCOX-2 and c-Myc play important roles in the incidence and progression of SCC,the high expression of COX-2 and c-Myc can be the indicator for the prognosis of SCC.

Key words:Endometrial neoplasms; c-Myc; Cyclooxygenase-2; Microvessel density; Immunohistochemistry

收稿日期：2013-08-23修回日期：2014-09-10编辑：相丹峰

中图分类号：R737.33

文献标识码：A

文章编号：1006-2084(2015)05-0911-03