★　赖杰仁第一作者：赖杰仁，高级工程师，执业药师。研究方向：中药新制剂与新技术。Tel：079-88883，E-mail：smz_lai@63.com。　谢二磊　(.九江市中医医院　江西 九江 33000；.江西省药品科技开发部　南昌 33009)

HPLC法测定太平糖克丸中马钱苷的含量

★赖杰仁1*第一作者：赖杰仁，高级工程师，执业药师。研究方向：中药新制剂与新技术。Tel：0792-8188832，E-mail：smz_lai@163.com。谢二磊2(1.九江市中医医院江西 九江 332000；2.江西省药品科技开发部南昌 330029)

摘要：目的：建立太平糖克丸中马钱苷的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法，Prontosil 120-5-C18柱(250mm×4.6mm,5μm)，流动相为四氢呋喃-乙腈-甲醇-0.05%磷酸溶液(1∶8∶4∶87)；流速1.0mL/min；检测波长236nm；柱温30℃；进样量10μL。理论板数按马钱苷峰计算应不得低于4 000。结果：马钱苷对照品进样量在0.030 2 g～3.017 7 g范围内，进样量与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 9)，马钱苷平均加样回收率为97.24%，RSD值1.55%(n=6)。结论：本方法操作简便，准确可靠，专属性强，重现性好。适宜用于测定太平糖克丸中马钱苷的含量。

关键词：太平糖克丸；马钱苷；含量测定；高效液相色谱法

太平糖克丸系九江市中医医院自主研发的省重点专科糖尿病科特色医院制剂，已取得医疗机构制剂批准文号。本品由山茱萸、生地、黄芪、女贞子等十余味中药组成，具有益气养阴，化浊降糖的功效，临床应用于2型糖尿病症属气阴两虚或无症状糖耐量减损者，安全可靠，疗效显著。中国药典从2005版起将马钱苷作为中药材山茱萸的质量控制指标之一，基于马钱苷在复方制剂中作为主要的指标性成分，本文采用高效液相色谱法测定马钱苷的含量，将马钱苷的含量作为太平糖克丸的质量评价指标，旨在为本医院制剂建立内控标准。

1仪器与药品

Waters系列高效液相色谱仪，包括：Waters 600 controller, PDA2996型二极管阵列检测器，Empower化学工作站；SHIMADZULC-2010AHT高效液相色谱仪，紫外可变波长检测器，LC-solution色谱工作站；KQ5200B型超声波清洗机(昆山市超声仪器有限公司)。

马钱苷对照品(含量测定用，99.2%，111640-201005，中国药品生物制品检定所)，甲醇、四氢呋喃、乙腈均为色谱纯，其他试剂为分析纯。

太平糖克丸(批号：20120601、20120602、20120603、20120701、20120702、20120703、20120901、20120902、20120903、20120904，九江市中医医院研制)。

2.1色谱条件色谱柱：Prontosil 120-5-C18柱(250mm×4.6mm,5μm)。流动相：四氢呋喃-乙腈-甲醇-0.05%磷酸溶液(1∶8∶4∶87)；流速：1.0mL/min；检测波长：236nm；柱温：30℃；进样量：10μL。理论板数按马钱苷峰计算应不得低于4000。

2.2检测波长的确定用PDA检测器对马钱苷对照品与样品溶液中与马钱苷对照品相应位置上的色谱峰在400～210 nm波长范围内进行光谱扫描，结果均在236nm波长附近处有最大吸收，故确定检测波长为236nm。

2.3样品溶液的制备

2.3.1对照品溶液的制备精密称取于五氧化二磷减压干燥12h的马钱苷对照品15.21mg，置50mL量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，即得对照品储备液。精密移取对照品储备液5mL，用50%甲醇定容至50mL容量瓶中，即得马钱苷对照品溶液。

2.3.2供试品溶液的制备重量差异项下本品适量，研碎，取约1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇25.00mL，密塞，称定重量，加热回流60min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3.3阴性对照样品溶液的制备除山茱萸以外，其余各药材按太平糖克丸处方量制备阴性对照样品，同供试品溶液制备方法，制得缺山茱萸的阴性对照样品溶液。

2.4方法的专属性试验分别精密吸取供试品溶液、阴性对照样品溶液与对照品溶液各10μL，注入液相色谱仪，按“2.1”项下色谱条件测定。结果显示马钱苷峰形良好，基线平稳，对照品、供试品在相同时间有一色谱峰，且阴性对照样品无干扰，见图1。

2.5线性关系考察分别吸取上述对照品溶液1,5，10，20μL，对照品母液10μL，注入液相色谱仪中，按“2.1”项下色谱条件测定对照品峰面积，以进样量与峰面积进行回归处理，回归方程为：Y=1.58×106X+6.21×103(n=5)，马钱苷对照品进样量在0.030 2～3.017 7 μg范围内样品进样量与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 9)。

2.6精密度试验按“2.1”项下色谱条件，精密吸取对照品溶液10μL，重复进样6次，测定马钱苷峰面积值，计算得对照品峰面积值相对标准差为0.2%，测定方法的精密度良好。

A.马钱苷对照品溶液；B.供试品溶液；C.阴性对照

2.7稳定性试验按“2.1”项下色谱条件，分别在0,1,3,5,7,9,12,24h，精密吸取照“2.3.2”项下制备的供试品(批号：20120701)溶液10L，测定供试品溶液中马钱苷峰面积值，计算供试品马钱苷峰面积值的相对标准差为1.85%，表明供试品溶液在24h内基本稳定。

2.8重复性试验重量差异项下本品(批号：20120701)适量，研碎，取约1g，共6份，精密称定，照“2.3.2”项下制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定，处理结果数据，平均含量为0.8786mg/g，RSD为1.62%，方法重现性良好。

2.9加样回收率试验重量差异项下本品(批号：20120701，马钱苷含量为0.8786mg/g)，研细，取6份，每份约1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入含马钱苷(浓度30.177μg/mL)对照品的50%甲醇混合溶液25.00mL，称定重量，照“2.3.2”项下制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定，计算加样回收率(见表1)。样品中马钱苷平均回收率为97.24%，RSD值为1.55%(n=6)，马钱苷回收率良好。

2.10耐用性试验重量差异项下本品(批号：20120701、20120702)，研细，取约1.0g，精密称定，照“2.3.2”项下制备供试品溶液，分别用A：Prontosil 120-5-C18(250mm×4.6mm，5μm)、B：Agilent Eclipse XDB-C18(250mm×4.6mm,5μm)、C：Diamonsil C18(250mm×4.6mm,5μm)三种品牌的色谱柱，按“2.1”项下色谱条件测定马钱苷含量，马钱苷含量的RSD值低于1.0%，见表1。

表1　不同色谱柱测定结果马钱苷含量

表2　太平糖克丸中马钱苷含量(n=4)

2.11样品测定重量差异下本品10批次，研细，各取约1g，精密称定，照“2.3.2”项下制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定，计算马钱苷含量(见表3),马钱苷含量在0.6221～0.9136mg/g。根据表2测定结果，考虑药材来源、配制操作等因素的差异影响，设以平均含量的80%为太平糖克丸马钱苷含量的限度，即规定：本品每1g含山茱萸以马钱苷(C17H26O10)计，不得少于0.60mg。

3讨论

3.1流动相的选择方法学研究实验中，分别比较了以甲醇-0.1%磷酸、乙腈-0.1%磷酸和四氢呋喃-乙腈-甲醇-0.05%磷酸溶液为流动相，考察马钱苷的分离情况及峰形，结果以四氢呋喃-乙腈-甲醇-0.05%磷酸溶液(1∶8∶4∶87)为流动相的分离情况及峰形为佳；故确定流动相为：四氢呋喃-乙腈-甲醇-0.05%磷酸溶液(1∶8∶4∶87)。

3.2供试品溶液制备的方法考察在供试品溶液的制备方法实验中，分别考察了加热回流60min，超声提取(功率300W，频率25kHz)60min两种提取方式，结果显示，加热回流提取较为充分，故采用加热回流方式制备供试品溶液。分别选择了30%甲醇、50%甲醇和甲醇为提取溶剂，考察提取溶剂的影响，结果以50%甲醇提取效果最好。分别加热回流30,60,90min，考察结果显示，加热回流60min即可得满意结果。

参考文献

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[2]国家药典委员会.中国药典·一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：732-733.

[3]冯堃.HPLC法测定浓缩六味地黄丸中马钱苷含量[J].郑州大学学报(医学版),2008,43(4):790-791.

[4]潘建德.高效液相色谱法测定六味地黄口服液中马钱苷的含量[J].安徽医药，2006，10(3)：185-186.

征稿启事

《江西中医药》所设的重点栏目有《明医心鉴》、《滕王阁医话》等。《明医心鉴》以介绍名老中医经验和中医临证心得为主，重点刊载中医关于疑难病的诊疗经验，要求观点、方法新，经验独到。《滕王阁医话》主要反映中医教学、科研、临床的一得之见，要求以小见大，有感而文，语言生动流畅，可读性强，富于知识性、趣味性。

Determination of Loganinin in Taiping Tangke Pills by HPLC

LAI Jie-ren1, XIE Er-lei2

1.JiujiangHospitalofTCM,Jiujiang332000,China；

2.JiangxiProvincialEngineeringResearchCenterforDrugandMedicalDeviceQuality,Nanchang330029,China.

Abstract:Objective: To establish a HPLC method for the content determination of Loganin in Taiping Tangke pills. Methods: Samples were determined by HPLC on the C18column(250mm×4.6mm,5μm). The column temperature was 30℃. The mobile phase was consisted of tetrahydrofuran - acetonitrile - methanol - 0.05% phosphoric acid (1∶8∶4∶87). The flow rate was 1.0 mL/min at UV detection wavelength of 236 nm. Results: The lincear range of Loganin was 0.030 2 g～3.017 7 g，r=0.999 9. The average recovery of Loganin is 97.24%，RSD=1.55% (n= 6). Conclusion: The method is convenient，accurate，specificity and reproducibility for quality control of Taiping Tangke Pills.

Key words:Taiping Tangke Pills；Loganin；Determination；HPLC

收稿日期：(2014-11-10)编辑：曾文雪

中图分类号：R286.0

文献标识码：B