徐风芹　杨有琴　刘　津　海洋石油总医院检验科,天津市　300452



化学反应法检测细菌性阴道病的临床应用分析

徐风芹杨有琴刘津海洋石油总医院检验科,天津市300452

摘要目的：采用细菌性阴道病联合测定试剂盒(化学反应法)，结合传统湿片常规检测妇女阴道分泌物，探讨其临床应用价值，为细菌性阴道病的诊断提供理论依据。方法:对2013年6月-2014年6月在妇科门诊和住院的725例阴道分泌物标本同时进行湿片检查和细菌性阴道病联合测定试剂盒检测，做分析比较。结果:各种阴道炎中细菌性阴道炎感染率最高，其次是真菌、滴虫，各种阴道感染既可单独存在，也可合并感染。结论:细菌性阴道病联合测定试剂盒检测简便、快速、敏感，同时与常规镜检联合检测，大大提高妇科各种阴道炎症的检出，值得临床推广使用。

关键词细菌性阴道病阴道分泌物常规镜检联合检测

生殖道感染是正常育龄妇女常见多发疾病，主要临床症状为外阴瘙痒、阴道分泌物增多等，给患者的生活和工作带来了诸多不便，对患者的心理和生理都造成了很大的影响，严重者甚至可引起宫内感染、盆腔感染等。主要包括细菌性阴道病(Bacterial vaginosis,BV)、念珠菌性阴道炎、滴虫性阴道炎及其他阴道炎症。此类疾病多由阴道菌群失调、病原体侵入引起。检测生殖道感染的传统方法为阴道分泌物常规检查，即通过阴道pH值、清洁度及微生物检查来判断女性阴道分泌物是否异常。此法要求检测人员要有丰富的经验，主观性强且工作量大。近年来本实验室引进一种BV联合测定试剂盒，其操作简便、灵敏度高、特异性强。现就我院2013年6月-2014年6月在妇科门诊和住院的725例妇女BV联合测定和常规检测进行对比分析，结果报告如下。

1样本与方法

1．1检测样本725例阴道分泌物样本均来自于2013年6月-2014年6月在我院妇科门诊和住院患者，包括自述有阴道分泌物增多、有异味、外阴部瘙痒等症状而做检查的患者以及放置或取节育环、人工流产及引产前检查的患者，年龄19～58岁，平均年龄36.5岁。样本由妇科医生用消毒的无菌棉拭子自患者阴道后穹隆处取出2份阴道分泌物，一份用于BV联合测定技术检测，另一份用于阴道分泌物常规检测。标本采集后15min内送检。所有患者采集标本时，经医生了解取样前72h内无性生活，无阴道用药及任何阴道灌注。

1．2检测方法仪器：奥林巴斯双目显微镜、BV反应板加热器。试剂：生理盐水，BV联合测定试剂盒(化学反应法，珠海丽珠试剂股份有限公司生产)。操作：BV联合测定试剂盒检测项目包括唾液酸酶、过氧化氢浓度和白细胞酯酶的定性检测及阴道pH值检测。由检验技术人员严格按照说明书进行操作。而另一份标本湿片检查，参照《全国临床检验操作规程》[1]，检验技术人员收到标本后用生理盐水直接涂片，在高倍镜下查找滴虫、真菌孢子及菌丝，并判断清洁度。

1．3结果判断(1)清洁度判断标准：清洁度判断分为Ⅰ～Ⅳ度。Ⅰ度：镜下可见大量上皮细胞和阴道杆菌；Ⅱ度：有部分阴道杆菌和上皮细胞，也有少量脓细胞和杂菌；Ⅲ度：有大量的脓细胞和杂菌，只见少量阴道杆菌和上皮细胞；Ⅳ度：镜下无阴道杆菌和上皮细胞，几乎全是脓细胞和大量杂菌。清洁度Ⅰ～Ⅱ度为正常，Ⅲ～Ⅳ度为异常，大多数可能为阴道炎。(2)联合测定试剂盒结果判断：pH值检测对照比色卡进行判读，正常阴道pH值≤4.4。唾液酸酶：检测孔颜色变蓝色为BV阳性，不变色为BV阴性。过氧化氢：过氧化氢浓度过低，检测孔不变色，提示阴道微生态失衡，为过氧化氢检测阳性。检测孔颜色变蓝色，说明过氧化氢浓度处于正常水平，过氧化氢检测阴性。白细胞酯酶：检测孔颜色变蓝色,白细胞酯酶阳性, 不变色为阴性。

2结果

2.1联合测定试剂盒725例患者标本，725例患者阴道分泌物BV结果,结合患者临床症状，确诊137例，阳性率为18.90%，其中三项均为阳性112例，阳性率15.45%，白细胞酯酶和唾液酸酶同时阳性25例，阳性率3.45%；过氧化氢和白细胞酯酶同时阳性346例，阳性率47.72%；单项白细胞酯酶阳性患者217例，阳性率为29.93%。结果见表1。

表1　联合测定试剂盒检测结果

2.2725例患者阴道分泌物直接湿片检测,结果发现:滴虫检出25例，阳性率为3.4%；真菌检出116例，阳性率为16.0%。其中真菌性阴道炎合并BV 38例，滴虫性阴道炎患者合并BV 14例。725例患者阴道分泌物直接湿片清洁度检测。清洁度检测Ⅰ～Ⅱ度内视为正常，Ⅲ～Ⅳ度为异常，多数为阴道炎。

2.3725例患者阴道分泌物清洁度检测：Ⅰ度、Ⅱ度患者319例，占44.0%；Ⅲ度、Ⅳ度患者为406例，占56.0%。在唾液酸酶试验阳性患者中有41例阴道分泌物清洁度为Ⅰ～Ⅱ度，占23.4%。

3讨论

阴道分泌物俗称白带，是由女性生殖系统分泌的一种白色稀糊状液体。阴道寄生菌群混杂在阴道分泌物中，一般不致病，这是由于正常育龄妇女的内分泌激素作用，使得阴道上皮细胞增生，其表层细胞中存在丰富的糖原，十分有利于乳酸杆菌生长。此细菌占阴道菌群的90%以上，抑制了其他致病菌的生长，起到降低阴道pH 值、维持阴道菌群平衡等保护作用[2，3]。

当某些原因引起女性雌激素水平下降，或用碱性清洗液过度冲洗阴道及在大量使用抗生素后，乳酸杆菌的生长会受到抑制；性交频繁等则可导致致病性厌氧菌和加特纳菌大量繁殖，进而引起阴道微生物生态失衡，导致BV。由于厌氧菌产生的脱羧酶，激发加特纳菌产生挥发性胺类，释放出鱼腥臭味，黏附有致病菌的阴道表皮细胞脱落，引起阴道分泌物量增加，化学性质也随之发生了改变。这种变化主要表现在：pH 增高；致病菌分泌的胞外酶(如唾液酸酶)增高和代谢产物增高，阴道内的白细胞及吞噬细胞等阴道细胞被细菌破坏释出的白细胞酯酶增高以及正常菌群的酶与代谢产物过氧化氢减低。由于菌群紊乱，阴道炎症并不十分明显，分泌物中的白细胞减少。在常规镜检中，主要依靠白细胞、上皮细胞、阴道杆菌及杂菌的比例划分清洁度，操作中会因为加入过量生理盐水而导致视野中细胞、杂菌数减少。检测发现在唾液酸酶试验阳性患者中有41例其阴道分泌物清洁度为Ⅰ～Ⅱ度，占23．4%，因此，单纯的清洁度检查对妇科炎症有一定的漏诊率。乳酸杆菌的检测用盐水湿片镜检不能确定，还需要革兰氏染色，步骤多、检验时间长，且仅能从形态上予以判断。

BV联合测定试剂盒是用酶学方法检测阴道分泌物。唾液酸酶是由引起BV的致病菌分泌的一种特异性胞外酶，此酶可排至阴道分泌物中，在正常妇女阴道中一般无此酶，因此具有较高的特异性和敏感性。其浓度与BV发病程度成正比。过氧化氢由阴道乳酸杆菌分泌，其浓度与乳酸杆菌数量呈正相关，不受药物、宫颈黏液等因素的影响，因此可用过氧化氢来表示分泌物中乳酸杆菌量的多少。白细胞酯酶主要存在于粒细胞的胞浆中，当阴道发生炎症时，病原菌的趋化作用在病灶部位聚集，释放大量白细胞酯酶，可直接反映阴道内炎症和黏膜损伤程度。

研究发现，随着人们卫生意识的增强，生活水平的提高，滴虫性阴道炎的感染率明显下降，而机会菌感染性阴道炎，如真菌阴道炎和BV有所上升。这些感染多无症状，其危害很大，有文献报道称BV与妇女盆腔炎、剖腹产后子宫内膜炎、羊水感染、绒毛膜羊膜炎以及早产等有关[4，5]。因此，建议将BV检查作为阴道分泌物常规检验项目。另外研究还发现，BV可合并真菌、滴虫感染。滴虫是有氧生成体，它消耗阴道内的氧从而刺激厌氧菌繁殖，因此，50%以上的滴虫感染者同时伴有BV的感染[6]。

在操作中，检验人员需要注意，联合测定试剂盒法虽然操作省时省力，但是由于应用的是化学反应法，酶试剂欠稳定，为确保检测准确性，试剂盒要在2～8℃避光、干燥条件下保存。另外，本方法对标本要求严格，有颜色的阴道分泌物可能会影响结果的判读，如带血的样本、阴道用药后、带有精液等都可误导结果。因此，显微镜湿片镜检与BV联合测定试剂盒联合使用，可以提高妇科阴道感染的诊断率，避免误漏诊，对阴道微生态学研究以及临床用药指征提供更为快速有效的分析和可靠的依据。

参考文献

[1]叶应妩，王毓三，申子瑜，主编.全国临床检验操作规程〔M〕.第2版.南京：东南大学出版社，2006：324.

[2]李崇剑，许凯声.6 803例阴道分泌物常规检查结果分析〔J〕.上海医学检验杂志，2000,15(1)：56.

[3]石丽琳，李志琴．688例阴道分泌物检查结果分析〔J〕 ．检验医学与临床，2011，8(9):1099.

[4]Linda M，Barbara R，etal．BV blue test for diagnosis of bacterial vaginosis〔J〕．J Clin Microbiol，2003，41(5)：1925-1928．

[5]田丰莲，杨冬梓，张小庄，等．广东地区围绝经期妇女健康状况和需求调查〔J〕．第一军医大学学报，2004，19(8)：928-932．

[6]杨林．阴道分泌物常规检测与BV 实验联合运用的分析〔J〕 ．临床和实验医学杂志，2012,11(17)：1420-1421.

(编辑羽飞)

收稿日期2015-02-04

中图分类号：R711．31

文献标识码：B

文章编号：1001-7585(2015)11-1517-02