牛天增,乔玉峰,李明花,李建伟

(1.山西振东制药股份有限公司，山西 长治 047100；2.长治医学院 药学系，山西 长治 046000)



苦参及其制剂中生物碱成分测定方法研究进展

牛天增1,乔玉峰1,李明花1,李建伟2*

(1.山西振东制药股份有限公司，山西 长治 047100；2.长治医学院 药学系，山西 长治 046000)

苦参为豆科槐属植物，主要成分为生物碱，传统医学认为其具有清热燥湿、杀虫利尿等功效，广泛用于中成药及临床方剂之中。现代药理学研究表明，苦参具有抗病原体、抗肝炎、抗炎、抗过敏、平喘、抗肿瘤、解热、止泻、抗心律失常及心肌缺血等作用。对近年来苦参及其制剂中生物碱成分的测定方法进行总结，为其进一步开发利用提供依据。

苦参；生物碱；苦参碱；含量测定

苦参是豆科槐属植物苦参(SophoraflavescensAit)的干燥根，始载于《神农本草经》，是我国常用的传统中药，其味苦、性寒，具有清热解毒、祛风燥湿、杀虫止痛之功效[1]，多用于热痢便血、黄疸尿闭、赤白带下、阴肿阴痒、湿疹湿疮等症，外治滴虫性阴道炎[2]。苦参的主要化学成分是生物碱，具有广泛的药理活性，使得苦参大量用于中成药和临床处方。随着现代分离分析技术的发展，高效液相色谱、高效毛细管电泳色谱、气相色谱及质谱联用技术等，由于其分离效率高、选择性强、灵敏度高、适应性广等优点，被广泛用于苦参生物碱的分析方法中。本文对近年来苦参及其制剂生物碱成分的测定方法进行全面总结，以期为今后对苦参及其制剂的进一步开发利用提供参考。

1 薄层色谱法

薄层扫描法因操作简便、响应快速、重现性好、灵敏度较高、样品前处理要求低等特点，在生物碱成分的检测分析方面有着较多的应用。宋茹等[3]以甲苯-丙酮-乙醇-氨水(10∶10∶1∶ 0.1)为展开剂，用薄层扫描法对复方苦参注射液中苦参碱进行含量测定。样品含量在2.16～7.56μg范围内呈良好线性关系，平均回收率99.0%。徐馨等[4]建立了苦参碱、氧化苦参碱、槐果碱和槐定碱的薄层层析检测体系。任欣等[5]用薄层色谱法对辽宁产苦参不同组织中苦参碱和氧化苦参碱的含量进行了测定。其中苦参碱含量以种子中为最高(0.065%)，氧化苦参碱含量以根最高(3.85%)。

2 滴定法

滴定法是测定生物碱的传统方法，该法较为复杂，对操作过程要求高，多用于生物总碱的定量测定。陈依群等[6]采用阴离子表面活性剂双相滴定法测定苦参碱葡萄糖注射液中苦参碱的含量。在酸性条件下进行滴定，苦参碱含量回收率为99.3%，重复性试验相对标准偏差(RSD)为0.43%，中间精密度RSD为0.48%和0.41%。冯伟旭等[7]采用滴定法检测苦参栓中苦参碱的含量，苦参碱含量为97.87%。吴用彦等[8]用滴定法和高效液相色谱法对苦参原药材、乙醇提取液及酸水提取液中苦参总碱进行含量测定，滴定法所得的RSD值较高效液相色谱法(HPLC)低。

3 酸性染料比色法

陈静等[9]采用酸性染料比色法分析苦参不同组织部位中总生物碱的含量，总碱含量自高到低依次为韧皮部(35.14mg/g)、木质部(33.12mg/g)、髓部(31.46mg/g)、木栓层(低于线性范围)。仵文英等[10]利用该法测得苦参脂质体中苦参碱的含量为1.51mg/mL。邵晶等[11]用此法测定不同产地苦参药材中总生物碱的含量，不同产地苦参药材中总生物碱含量差异较大。酸性染料比色法在检测过程中会出现假阳性反应，并且显色剂的浓度对测定结果有干扰，其结果的准确性与操作过程及相应试剂相关。

4 高效液相色谱法

高效液相色谱已经成为当今化学成分分析检测最常用、最有力的工具之一。其分析速度快、定量精确、应用广泛，在现代药物分析中不可或缺。周秀梅等[12]利用HPLC法同时测定复方苦参注射液中苦参碱、槐定碱及氧化苦参碱的含量，酸性洗脱系统出峰快、峰型好，3种生物碱及杂质分离完全。张萍等[13]建立了同时测定苦参中5种生物碱含量的HPLC方法，所建立的方法精密度和准确度均良好。边敏等[14]首次应用离子液体1-丁基-3甲基咪唑四氟硼酸盐和三乙胺作流动相添加剂分离苦参中的生物碱，离子液体使生物碱达到完全分离、抑制生物碱分离时的拖尾，且对生物碱的保留影响较小。陈静等[15]以氧化苦参碱为参照物，建立氧化苦参碱与槐果碱、苦参碱、氧化槐果碱、槐定碱的相对校正因子，采用外标法测定该5种生物碱的含量，其相对校正因子重现性较好；21批苦参药材和饮片中5个生物碱的含量用一测多评法进行测定，其计算值与外标法实测值间无明显差异。

5 气相色谱法

气相色谱法分离效率高，分析速度快，检测灵敏度高，选择性好。只是在对组分直接定性分析时，须用已知物或已知数据与相应的色谱峰进行比对，或与其他方法联用，才能获得肯定的结果。江林等[16]对苦参碱和氧化苦参碱的填充柱气相色谱行为进行对比，确定苦参总碱的响应峰，对苦参及其制剂中生物碱的含量进行测定。王青虎等[17]利用气相色谱法测定查干汤中苦参碱的含量。苦参碱在0.2～1.0μg范围内线性关系良好，平均回收率为98.80%。侯伟雄等[18]以二十三烷为内标，用气相色谱法测定了妇炎平泡腾片中苦参碱的含量。

6 近红外光谱测定法

近红外光谱技术分析快速、无损、绿色，在大批量和过程分析中优势独特。陈晨等[19]分别采用近红外透射和反射模式采集样品光谱，建立近红外光谱与参考值之间的校正模型，并对未知样品的含量进行预测，建立的苦参碱、槐果碱、氧化槐果碱和氧化苦参碱模型性能良好。巩晓宇等[20]采用近红外漫反射光谱技术对苦参中苦参碱和氧化苦参碱的含量进行测定，建立了苦参总碱的定量分析模型。所建立的模型可较为准确地预测未知苦参提取物中苦参总碱含量。陈晨等[21]在线采集渗漉液的近红外光谱，以总生物碱含量为对照，建立近红外光谱与对照值之间的校正模型，并对渗漉过程的未知样品进行含量预测，所建立的定量模型准确度高，方法方便快速、准确可靠。

7 毛细管电泳及电分析法

YIN JY等[22]利用毛细管电泳配置电化学发光检测器检测喹诺里西啶类生物碱。槐定碱，苦参碱和氧化苦参碱在13min内得以完全分离，槐定碱和苦参碱的检测限为1.0nM，氧化苦参碱的检测限为40nM。WANG HY等[23]采用毛细管电泳配合场放大样品堆积技术对苦参中5种生物碱含量进行测定，被检测物的检测限为0.004～0.0013μg/mL。SONG JZ等[24]建立非水相毛细管电泳快速测定喹诺里西啶生物碱的方法。10种生物碱在18min内得以分离。对其中5个生物碱进行方法学考察，加样回收率为98.0～101.3%。10个生物碱的检测限为0.93～2.31μg/mL。

李利军等[25]利用电堆集-场放大进样非水毛细管电泳法分离测定苦参中的槐定碱、苦参碱和氧化苦参碱。三种生物碱在15min内出峰，峰面积的RSD均小于5%。检出限在1.01～2.02μg/L之间，比电动进样法灵敏度提高了23倍。和传统重力进样方法相比，三种生物碱用场放大电堆集法的相对富集倍数分别为201、178和258倍。姚慧琴等[26]研究了苦参碱类生物碱在玻碳电极上的直接电化学行为。玻碳电极上苦参碱和槐定碱在0.81V和0.92V附近均产生1个不可逆氧化峰，并且在一定条件下电极反应为扩散步骤控制，在相同条件下氧化苦参碱和氧化槐定碱均无氧化峰出现。在固体玻碳电极上运用直接电化学方法测定苦参碱和槐定碱含量的精密度和准确度符合测定要求。

8 质谱法

黄晓文等[27]以利用气相色谱-质谱法分离并测定了苦参中7种生物碱。朱燕萍等[28]采用液相色谱-质谱法测定苦参总碱片中苦参碱、氧化苦参碱和槐果碱的含量，三种生物碱平均回收率分别为99.2%、98.6%和98.9%。ZHANG L等[29]对大鼠进行口服苦参提取物后，以血浆中的盐酸伪麻黄碱作为内标物对苦参碱、氧化苦参碱和氧化槐果碱进行HPLC-MS分析。单次进样分析在12min内完成，三种成分的定量限分别为苦参1.0ng/mL，氧化苦参碱和氧化槐果碱为2.0ng/mL。LIU GO等[30]利用HPLC-ESI法对苦参中的生物碱进行了全面、系统的分离和表征，共鉴定了22个成分。通过保留时间和对离子碎片的分析，5个生物碱得到了明确鉴定。其它17个成分通过对离子碎片以及分子量信息的分析和检索进行了初步鉴定。该方法对苦参中活性生物碱成分进行了有益的表征，对苦参制剂的应用也多有帮助。

9 逆流色谱

LING JY等[31]采用超临界萃取苦参中的生物碱，利用高速逆流色谱进行分离，两相溶剂氯仿-甲醇-2.3×10-2M NaH2PO4，一步分离分别得到10.02mg苦参碱、22.07mg氧化槐果碱和79.93mg的氧化苦参碱，其含量分别为95.6%、95.8%和99.6%。YANG FQ等[32]利用pH区带精制逆流色谱从苦参根提取物中分离生物碱，甲基叔丁基醚和水平衡后，加入三乙胺(10mM)，以盐酸(5～10mM)水溶液洗脱，水相作为流动相，有机相作为固定相。4.5h内从1.0g苦参提取物中分离得到槐果碱(170mg)和苦参碱(600mg)，其纯度均超过98%。

10 其它测定方法

刘志才等[33]利用岛津ΜV-210紫外分光光度计对苦参膏中苦参总碱的含量进行了测定。苦参总碱的光谱图在200nm处有最大吸收，并且吸收值与苦参总碱的含量间存在着良好的线性关系。庞志功等[34]用丙二酸和醋酐缩合自制乙酸(β-二羧基-α-甲基)乙烯酯荧光试剂，利用苦参碱、氧化苦参碱对其有定量猝灭作用，达到测定苦参碱、氧化苦参碱的目的。其线性范围为2×10-9～8×10-6g/mL，最低检测限苦参碱为1.4×10-11g/mL，氧化苦参碱为4.5×10-12g/mL，测得苦参中苦参碱的含量为0.16%，氧化苦参碱的含量为2.5%。

11 结语

苦参及其制剂中生物碱的测定方法较多，不同的方法均有各自的适用性。随着现代分析测定技术的发展，更快速、更灵敏、更高效、适用性更强的分析方法不断地被开发出来。高效液相色谱法是含量测定强有力的工具。高效毛细管电泳技术、液质联用技术等在苦参生物碱的测定中有着独特的优势，显示了较好的应用前景。而对苦参生物碱含量的测定也向同时测定更多种成分发展，以便更全面地控制苦参药材及其制剂的质量，更有效地研究苦参炮制与配伍机理以及生物体内的代谢动力学。近年来有关苦参类生物碱的体外分析方法研究已经取得了一定的进展, 而对其体内代谢的进一步深入探索仍是研究的重点。

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(责任编辑：魏 晓)

Research Progress on the Determination Methods for Alkaloid inSophoraflavescensAit. and its Preparations.

Niu Tianzeng1, Qiao Yufeng1, Li Minghua1, Li Jianwei2*

(1.Shanxi Zhendong Pharmaceutical Co. Ltd., Changzhi 047100, China;2.Department of Pharmacy, Changzhi Medical College, Changzhi 046000, China)

SophoraflavescensAit. belong to Leguminosae sp., Sophora Linn plant, which main chemical ingredient is alkaloid. It have clearing heat, eliminating dampness, desinsection and dieresis effects in traditional medicine, widely used in traditional Chinese medicine and clinical prescriptions. Modern pharmacology studies suggest it possess effects such as antipathogenic, anti-hepatitis, anti-inflammatory, anti-allergy, relieving asthma, antitumor, antipyretic, antidiarrheal, anti-arrhythmia and anti-myocardial ischemia and so on. This paper summarized determination methods of alkaloid inSophoraflavescensAit. and its preparations in recent years, and to provide basis for its further development and use.

SophoraflavescensAit.; Alkaloid; Matrine; Content Determination

2015-05-15

牛天增(1985-)，男，博士，山西振东制药股份有限公司工程师，研究方向为中药质量控制。

李建伟(1973-)，男，长治医学院副教授，硕士生导师，研究方向为药物制剂学。E-mail: baolingf@126.com

R284.1

A

1673-2197(2015)19-0056-03

10.11954/ytctyy.201519023