孙娇 李莹 王悦 孙秀华 孙炳奇

沈阳市胸科医院结核病实验室，沈阳 110044

T-SPOT对青少年结核病诊断价值的研究

孙娇 李莹 王悦 孙秀华 孙炳奇▲

沈阳市胸科医院结核病实验室，沈阳 110044

目的探讨结核感染T细胞斑点试验 (T-SPOT)在青少年结核病诊断中的价值。方法回顾性分析本院2012年1月～2015年2月临床确诊为结核病并进行T-SPOT检测的162名青少年患者，并与结核抗体检测结果进行对比。结果T-SPOT对全体患者、肺结核患者和肺外结核患者检测的阳性率分别为63.58%、58.89%和69.44%，明显高于结核抗体检测的20.99%、23.33%和18.06%。结论T-SPOT诊断青少年结核病具有快速、准确、阳性率高的特点，对青少年人结核病具有极高的诊断价值。

结核感染T细胞斑点试验;青少年患者;结核病

全球约有1500万青少年暴露在结核病患者的环境中，其中不少人为“潜伏性结核感染”，即随时有可能发展为传染性结核病。全球每年新增的肺结核青少年人感染者超过65万，比世界卫生组织此前估计的人数多出近1/4。青少年肺结核患者体内存在的结核杆菌往往较少，因此取样、检测都更加困难，给临床医生正确诊断带来了巨大的困难。近年来，结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT testing，T-SPOT)因其具有高特异度和高灵敏度，被越来越广泛地应用于结核病的临床诊断。本研究对青少年结核病患者T-SPOT检测结果进行探讨，希望能够为临床诊治提供更多的参考依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析本院2012年1月～2015年2月临床确诊为结核病并进行T-SPOT检测的青少年患者(年龄≤16岁)共162例，平均年龄(14.38±2.26)岁，其中男性78例，平均年龄(14.55±2.31)岁，女性84例，平均年龄(14.21±2.22)岁。初治患者147例，平均年龄(14.33±2.30)岁；复治患者15例，平均年龄(14.80± 1.78)岁；肺结核患者90人，平均年龄(14.77±1.60)岁；肺外结核患者72例，平均年龄(13.89±2.82)岁。初治和复治患者，肺结核和肺外结核分组标准均参照《肺结核诊断和治疗指南》［1］。各组患者的年龄差异无统计学意义(P＜0.05)。所有患者均排除糖尿病、艾滋病等免疫系统缺陷性疾病。在72例肺外结核患者中患病率最高的3种肺外结核病分别为结核性胸膜炎、颈淋巴结核和结核性脑膜炎，其在肺外结核病中所占比例分别为52.78%、16.67%、12.50%，其中有5名患者同时患有两种或两种以上的肺外结核病。

1.2 实验材料

RPMI1640细胞培养液，Ficoll-Hyperque淋巴细胞分离液；PBS缓冲液；T-SPOT试剂盒 (上海复星科技有限公司)，该试剂盒中含有包被小鼠抗人IFN-γ单克隆抗体的96孔微孔培养板；特异混合多肽ESAT-6及CFP-10(产地:Oxford Immunote Ltd.，Oxford，UK)；阳性对照为植物血凝素(PHA)；细胞培养液为AIM-V培养基；浓缩的碱性磷酸酶标记小鼠抗人IFN-γ单抗；底物显色剂BCIP/NBT PLUS。

2.2 T-SPOT与结核抗体检测阳性率的比较

1.3 实验步骤

在162名结核病患者中，T-SPOT检测阳性为103例，阳性率为63.58%；结核抗体检测阳性为34例，阳性率为20.99%，T-SPOT检测阳性率明显高于结核抗体检测(P＜0.01)。在肺结核及肺外结核患者中，T-SPOT检测阳性率均明显高于结核抗体检测(P＜0.01)(表2)。

1.4 统计学分析

2000年以来，广东一次能源消费总量快速增长，由2000年的7 983万tce增加到了2015年的 25 662万tce，增速呈放缓趋势，由“十五”和“十一五”期间10%以上的年均增长降至“十二五”期间2.8%的年均增长，比全国“十二五”年均增长低0.6%。分能源品种来看，2011年以后煤炭消费逐年下降，石油消费增速放缓、天然气和一次电力消费保持较快增速，其中一次电力消费年均增速接近8%。

得益于国家政策对新能源电动汽车的强力支持，电动汽车产业发展飞速，动力电池销量快速增长，随之报废的动力电池也日渐增多。据统计[1]，截至 2017年底，国内新能源电动汽车的保有量已达180万辆，而新能源汽车的动力电池寿命为4 ～ 5年，早期投入使用的电动汽车电池在2018年迎来报废初期，预计2020年报废量将超过23万t（21 GW·h），如图1所示。

采用SPSS 20.0统计软件包进行数据分析，计数资料比较采用χ2检验和Kappa一致性检验，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 T-SPOT与结核抗体检测结果的比较

军队是个锻炼人的地方，大多士兵退役之后，凭借自己的奋斗取得事业成功，但并不是所有人都能得到很好的发展。谢清森告诉记者，离开部队，很多士兵不能很好地适应新的生活、融入新的环境。

英国研究人员报告说，他们建立的最新模型显示，全球每年新增的肺结核青少年感染者超过65万，远高于世界卫生组织2012年估计的53万。

表1 T-SPOT与结核抗体检测结果的比较(n)

如果存在阳性对照无反应即说明受检对象的细胞免疫功能可能存在一定的减退，如果阴性对照出现阳性结果，那么可能存在操作不当所致的污染或者是机体处于某种病毒急性感染的状态(如流感或者急性肝炎导致IFN-γ大量产生)。

用8m l肝素钠抗凝真空采血管采集患者外周静脉血，加入Ficoll淋巴细胞分离液中18～25℃，1600×g，离心28min。用吸液管吸取白色、云雾状PBMCs层并转移至15ml尖底离心管中，加入RPMI 1640细胞培养液至10m l。600×g离心7min，弃去上清液用1ml培养液重悬沉淀。加RPMI 1640细胞培养液至10ml，350×g离心7 min，弃去上清液加350μl AIM-V培养液重悬沉淀。每个患者样本使用4个检测孔，每个检测孔加入100μl细胞终溶液(含有25万个活细胞)

表2 T-SPOT与结核抗体检测阳性率的比较［n(%)］

3 讨论

在162名结核病患者中，T-SPOT和结核抗体检测均为阳性共30例，均为阴性共55例；T-SPOT检测阳性而结核抗体检测阴性共73例，T-SPOT检测阴性而结核抗体检测阳性共4例，这两种方法的一致性比较结果为Kappa=0.1788，即两者的一致性较差(表1)。

建立农业园区，进一步丰富农副产品，有效带动乡村旅游业的发展，若乡村旅游业没有得到持续性新元素注入，则很难确保游客被吸引。可以建设花卉苗木种植基地，也可以结合当地地理特点，让游客充分体验农村生活的乐趣。此外，构建农村科技园，在进行果树种植过程中，可以为游客准备自己动手的场所，让游客切身体验农活的乐趣。可以将乡村畜牧场向农民开放，促使游客更近距离的接触乡村风情，也可以让游客参与到牲畜喂养中。

在本研究中,脓肿的直径≥5cm,置管引流组在住院天数、脓腔消失时间明显优于细针抽吸组(P<0.05)。虽然置管引流术对患者术后的护理和生活会造成一些不便,但对于脓肿直径≥5cm的患者,置管引流组较细针抽吸组患者的住院时间和脓腔消失时间等明显更短,且差异具有统计学意义(P<0.05)。因此对于脓肿直径≥5cm的患者而言,应用超声引导下经皮肝穿刺置管引流术进行治疗较细针抽吸术更适合,疗效更显著。此临床还应注意:①临床医师应严格掌握患者适应症,对于配合度较差、机体状况较差者,禁止使用;②穿刺前应明确最佳穿刺路径,避免发生气胸等并发症;③操作过程中应将针尖处于脓肿液化的中央部位。

酶联免疫斑点检测技术(enzyme-linked immunospot assay，ELISPOT)是近年来发展起来的细胞因子检测技术［2-4］，它能够在单细胞水平检测细胞因子的分泌情况，比ELISA更灵敏，能从(20～30)万个细胞中检出1个分泌该蛋白的细胞，因此仅需要少量标本，在检测抗原特异性细胞数量的同时也反映其功能，并与临床结果相关。目前研究认为，T-SPOT能够敏感地诊断活动性结核病［5-7］，在笔者的研究中，将T-SPOT检测与传统结核抗体检测结果进行比较，两者都是针对结核分枝杆菌的免疫学检测，结果显示，在162例临床确诊的青少年结核患者中，T-SPOT检测出103例阳性，而结核抗体仅检测出34例阳性，检测阳性率分别为63.58%和20.99%，T-SPOT检测的阳性率明显高于结核抗体。

另外笔者的研究数据显示，在全体青少年患者中，肺外结核患者为72例，占全体患者的44.44%。肺外结核［8-10］由于发病形式多样、多脏器性，发病迟缓，临床特征不典型［11-12］，获得细菌学依据困难，有些需手术或穿刺活检确诊，很多患者不能接受，因此肺外结核误诊、漏诊极为常见，常因此而延误治疗，严重影响患者的预后。在笔者的研究中，T-SPOT对肺外结核检测的阳性率可以达到69.44%，远高于结核抗体的18.06%，因此TSPOT检测可为肺外结核诊断和治疗提供重要依据。

综上所述，T-SPOT在青少年结核病的诊断与鉴别诊断方面有重要临床应用价值［13］，尤其是不宜获得痰标本的低龄青少年患者和肺外结核患者，此检测的诊断意义更大，并且整个实验操作相对简单快速，能够早期提供灵敏特异的结果，帮助临床医师作出正确诊断［14-15］，但由于此项检测价格较贵，且不是结核病诊断的“金标准”，因此不建议作为临床诊断的常规检测项目，应更多地用于诊断困难患者的辅助检测手段。

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Study on diagnostic value of T-SPOT for adolescent tuberculosis

SUN Jiao LIYing WANG Yue SUN Xiu-hua SUN Bing-qi▲
Laboratory of Tuberculosis,Shenyang Chest Hospital,Shenyang 110044,China

ObjectiveTo evaluate the value of tuberculosis infection T cell-SPOT testing(T-SPOT)in the diagnosis of adolescent tuberculosis.Methods162 adolescent patients clinically diagnosed with tuberculosis and given T-SPOT in our hospital from January 2012 to February 2015 were analyzed retrospectively and the results was compared with the tuberculosis antibody detection result.ResultsThe positive rates of T-SPOT for all patients,pulmonary tuberculosis patients and extra pulmonary tuberculosis patientswas 63.58%,58.89%and 69.44%respectively,which was significantly higher than that of tuberculosis antibody detection(20.99%,23.33%and 18.06%respectively).ConclusionT-SPOT has the features of rapidness,accuracy and high positive rate in the diagnosis of adolescent tuberculosis,which is of high diagnostic value for adolescent tuberculosis.

Tuberculosis infection T cell-SPOT testing;Adolescent patients;Tuberculosis

R52

A

1674-4721(2015)09(c)-0135-03

2015-04-13 本文编辑:许俊琴)

▲通讯作者