郑 金， 陈 滔，， 陆吉虎， 高 峰，， 候继波， 黎满香， 唐应华

(1.湖南农业大学动物医学院，湖南 长沙 410128;2.江苏省农业科学院/国家兽用生物制品工程技术研究中心，江苏 南京210014)

减蛋下降综合征(EDS)是由减蛋下降综合征病毒(EDS virus，EDSV)引起的以产蛋率下降为特征的传染病。本病的主要传播方式是垂直传播，也可通过呼吸道水平传播。所有年龄的鸡均可感染，但幼鸡感染后不表现任何临床症状，母鸡只是在产蛋高峰期表现明显［1］。EDSV由11条大小不等的蛋白质组成，纤突蛋白质是EDSV的主要衣壳蛋白质，纤突蛋白质包括3个结构域，即Tail、Shaft和Knob区，Knob区不但可识别宿主细胞受体而且能增强病毒的吸附能力［2］，Knob-S蛋白质存在良好的免疫原性［3］。

本试验选用昆虫杆状病毒表达系统，对EDSV的Knob-S蛋白质进行真核表达、纯化，经Western blotting和间接免疫荧光分析，确定表达的蛋白质具有免疫原性，为研究Knob-S蛋白质的生物学活性及相关疫苗奠定基础。

1 材料与方法

1.1 质粒、菌株、细胞、试验动物

大肠杆菌DH5α、pFastBac-1、转座用大肠杆菌宿主菌 DH10Bac、pMD18-T-Knob-S、草地贪夜蛾卵巢细胞(Spodoptera frugiperda)均由江苏省农业科学院保存。6周龄非免海兰褐雏鸡，购自北京华都峪口禽业集团。

1.2 主要试剂

EDSV-76由江苏省农业科学院国家兽用生物制品工程技术研究中心保存。BamHⅠ、HindⅢ工具酶、Ex Taq DNA 聚合酶、IPTG、DNA marker DL2000、DL15000、蛋白质 Marker、X-gal、T4 DNA 连接酶、DNA胶回收试剂盒和质粒小提试剂盒均购自宝生物工程有限公司，优级胎牛血清、Grace’s培养基、Sf-900ⅡSFM培养液、LipofectamineTM2000均购自Invitrogen公司，FITC标记的羊抗鸡的抗体为Promega公司产品，DMEM与RPMI1640培养基为GIBCO公司产品，细胞培养板为Costar公司产品，其余试剂均为进口或国产分析纯。……