鹅坦布苏病毒囊膜蛋白结构域II在大肠杆菌中的表达及免疫学鉴定

赵冬敏，黄欣梅，刘宇卓，韩凯凯，杨婧，谢星星，刘晓燕，李银

(江苏省农业科学院兽医研究所，农业部兽用生物制品工程技术重点实验室，国家兽用生物制品工程技术研究中心，江苏南京210014)

摘要：为了实现鹅坦布苏病毒囊膜蛋白(E蛋白)结构域II在大肠杆菌中的表达并对其进行免疫学鉴定，根据鹅坦布苏病毒JS804株囊膜蛋白基因序列，利用人工合成法获得鹅坦布苏病毒囊膜蛋白结构域II编码基因并引入限制性酶切位点，片段大小为507 bp。将合成的基因片段克隆入pGEX-4t-1原核表达载体中，构建重组表达载体pGEX-EII并转化至BL21(DE3)中。通过优化表达条件获得重组蛋白质并进行免疫学鉴定。结果显示，重组蛋白质分子量约为 4.4×10`4，Western-blot和间接免疫荧光检测结果表明重组蛋白质具有良好的免疫原性。

关键词：鹅坦布苏病毒；囊膜蛋白；结构域II

doi:10.3969/j.issn.1000-4440.2015.03.025

收稿日期：2014-11-11

基金项目：国家自然科学基金项目(31172345);江苏省自然科学基金项目(BK2012376)；江苏省农业科学院基本科研业务专项项目[ZX(15)4005]

作者简介：赵冬敏(1982-)，女，山东兖州人，博士，副研究员，主要从事家禽重大疫病流行病学和致病分子机制研究。(Tel)025-84390047；(E-mail)zhaodongmin126@126.com

通讯作者：李银，(E-mail)muziyin08@163.com

中图分类号：S858.322.5`+2

文献标识码：A

文章编号：1000-4440(2015)03-0619-05

Abstract：To express and immunoidentify goose tembusu virus envelope domain II in Escherichia coli, the encoding gene of goose tembusu virus JS804 strain envelope protein domain II was artificially synthesized with the length of 507 bp. The synthesized gene was then inserted into the prokaryotic vector pGEX-4t-1 for the construction of recombinant expression plasmid pGEX-EII and then transformed into E. coli BL21 (DE3). The recombinant protein with the molecular mass of 4.4×10`4 was successfully expressed in E. coli by optimizing the conditions of expression. Western-blot and IFA revealed the good immunogenicity exhibited by the recombinant protein.

Expression and immunology of domain II of goose tembusu virus envelope protein inEscherichiacoli

ZHAO Dong-min,HUANG Xin-mei,LIU Yu-zhuo,HAN Kai-kai,YANG Jing,XIE Xing-xing,LIU Xiao-yan,LI Yin

(InstituteofVeterinaryMedicine,JiangsuAcademyofAgriculturalSciences/KeyLaboratoryofVeterinaryBiologicalsEngineeringandTechnology,MinistryofAgriculture/NationalCenterforEngineeringResearchofVeterinaryBio-products,Nanjing210014,China)

Key words： goose tembusu virus；envelope protein;domain II

鹅坦布苏病毒属于黄病毒科黄病毒属成员。水禽感染该病毒后，其临床病症为卵泡出血、萎缩、变性及瘢痕化，部分出现脑膜出血，食欲急剧减退、产蛋量骤降，群内发病率高达100%，死亡率为 5%～28%[1-3]。鸭鹅坦布苏病毒自2010年暴发以来，已连年在中国多省大面积流行，并且感染的宿主谱还在不断扩大，蛋鸭、种鸭、雏鸭、蛋鹅、种鹅及蛋鸡等均出现坦布苏病毒感染的病例[4-6]。……