徐小波， 冯 宇， 陆志强， 胡东卫， 陈 哲

(1.江苏省农业科学院畜牧研究所，江苏 南京 210014;2.江苏省常熟市畜牧兽医站，江苏 常熟 215500)

控制猪产仔数的基因或标记已报道的有雌激素受体基因(ESR)［1］、促卵泡素 β 亚基基因(FSHβ)［2］、催乳素受体基因(PRLP)［3］和表皮生长因子基因(EGF)［4］等。它们是母猪生殖调节的关键基因，是生殖激素的受体基因，参与调节猪生殖道、卵巢及泌乳等的生长发育等。二花脸猪是江苏省最优秀猪种之一，以繁殖力高、肉质优良而著称于世。本试验选择FSHβ、ESR和PRLP 3个功能基因作为候选基因，采用PCR-RFLP进行多态性检测，同时对3个候选基因对二花脸猪的产仔与哺育性状进行相关性分析，以揭示二花脸猪高繁殖力的分子遗传机理，为二花脸猪的种质资源保护及开发利用提供依据。

1 材料与方法

1.1 试验猪群

试验猪群为常熟市牧工商总公司二花脸保种猪场的育种核心群108头母猪。母猪繁殖成绩统计范围为所有核心群母猪初产和经产的纯种繁殖产仔哺育记录。母猪群系谱资料完整，各胎配种与繁殖记录齐全，仔猪哺乳期为35 d。

1.2 试验方法

1.2.1 采样与DNA提取 用猪用耳缺钳夹取一小块耳缘组织(约0.10～0.15 g)，浸于EP管内70%乙醇中，-20℃冷冻保存。采用苯酚法提取DNA。

1.2.2 引物设计 分别参照赵要风等［2］、Short等［5］和 Drogemuller 等［6］的文献设计 FSHβ、ESR、PRLR基因多态位点引物。FSHβ-F:5'-CCTTTAAGACAGTCAATGGC-3';FSHβ-R:5'-ACTGGTCTATTCATCCTCTC-3'。ESR-F:5'-CCTGTTTTTACAGTGACTTTTACAGAG-3';ESR-R:5'-CACTTCGAGGGTCAGTCCAATTAG-3'。PRLR-F:5'-CGTGGCTCCGTTTGAAGAACC-3';PRLR-R:5'-CTGAAAGGAGTGCATAAAGCC-3'。引物用去离子水溶解，-20℃保存。

1.2.3 PCR反应 反应总体积为25.0 μl，Premix Ex Taq 12.5 μl，两端引物(100 μmol/L)各 0.5 μl，模板 DNA 1.0 μl，加纯水至 25.0 μl。PCR 反应条件为:95℃预变性5 min;94℃变性30 s、55℃退火45 s、72℃延伸45 s，32个循环，最后72℃延伸10 min。PCR产物经电泳检测后置于4℃保存。

1.2.4 酶切与电泳 ESR和PRLR基因扩增产物分别用PvuⅡ和AluⅠ限制性内切酶进行酶切。……