文∕贾 涛

（北京市饲料监察所）

1 方法原理

牛奶中β-内酰胺类药物经乙腈提取，正己烷脱脂后，经C18净化小柱净化，取适量上清液过0.22 µm滤膜后，供液相色谱-串联质谱仪测定。

2 试剂和材料

以下所用的试剂，除特别注明者外均为分析纯试剂；水为符合GB/T 6682规定的二级水。

青霉素G、青霉素V、阿莫西林、羧苄西林、氨苄西林、苯唑西林、氯唑西林、萘夫西林、头孢喹肟、头孢氨苄、头孢拉定、头孢唑啉和头孢哌酮对照品（纯度均大于95.0%）；乙腈（色谱纯）；正己烷；甲酸（色谱纯）。

标准储备液（1 mg/mL）：准确称取适量的青霉素G、青霉素V、阿莫西林、羧苄西林、氨苄西林、苯唑西林、氯唑西林、萘夫西林、头孢喹肟、头孢氨苄、头孢拉定、头孢唑啉和头孢哌酮，用50%乙腈水溶液溶解稀释，分别配制成1 mg/mL的标准储备液。4 ℃下保存，有效期为1 周。

混合标准工作液（10 µg/mL）：分别准确吸取0.1 mL的青霉素G、青霉素V、阿莫西林、羧苄西林、氨苄西林、苯唑西林、氯唑西林、萘夫西林、头孢喹肟、头孢氨苄、头孢拉定、头孢唑啉和头孢哌酮标准储备液至10 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀即得。4 ℃下保存，有效期为1 周。

3 仪器和设备

超高效液相色谱-串联质谱仪（配电喷雾离子源，美国Waters公司，Waters Quattro Premier XE）；分析天平（感量0.00001 g）；天平（感量0.01 g）；高速离心机；涡旋混合器；水平振荡器；固相萃取装置；BakerBond C18固相萃取柱（500 mg/6 mL，或相当者）；氮吹仪；滤膜（0.22 µm）。

4 试验方法

4.1 试验仪器条件

4.1.1 液相色谱条件

色谱柱：BEH C18（50 mm×2.1 mm，1.7 µm）；流动相：A相为0.1%甲酸乙腈溶液，B相为0.1%甲酸水溶液；梯度洗脱：0～1 min，维持5%A；1～2.5 min，5%A线性变化至50%；2.5～4 min，维持50%A；4～5 min，维持5%A。流速：0.3 mL/min；柱温：30 ℃；进样量：10 µL。

4.1.2 质谱条件

离子源：电喷雾离子源；……