葛宜枝，王瑞鲲，王 磊，谢云斌，刘星妍，李湘鸣

(扬州大学 医学院 预防医学教研室， 江苏 扬州 223900)

研究论文

RNR3调控重组LacZ基因酵母细胞对化学诱变原的筛选

葛宜枝，王瑞鲲，王 磊，谢云斌，刘星妍，李湘鸣*

(扬州大学 医学院 预防医学教研室， 江苏 扬州 223900)

目的建立化学致突变物的体外快速筛选方法。方法用PCR法从酵母基因组中扩增RNR3启动子，将其插入到pMP206/ERE报告载体，将该载体转入W303-1A酵母细胞。当化学诱变原作用于酵母细胞时，会诱导β-半乳糖苷酶表达，可对具有DNA毒性的化学物进行筛选。结果许多可造成DNA损伤的化学诱变原可诱导RNR3的表达。使DNA发生烷基化的诱变原(甲磺酸甲脂和瘤可宁)、使DNA发生断裂的诱变原(顺铂、4-硝基-N-氧化喹啉、博来霉素和福来霉素)、抑制DNA合成酶或拓扑异构酶的诱变原(5-氟尿嘧啶、羟基脲和喜树碱)均可诱导RNR3的表达。结论RNR3调控的重组Lac Z报告基因酵母可用于对许多化学诱变原的筛选，筛选过程可在96孔板中进行，因而具有高通量性。

诱变原；酵母；RNR3基因；β-半乳糖苷酶

化学诱变原引起的基因的突变，可能是导致肿瘤发生的主要机制之一。建立一种快速的筛选化学诱变原的方法是预防和治疗肿瘤的关键。传统的致突变检测方法Ames出现假阳性或是假阴性的机率较高[1]，且是针对原核生物，无法进行快速、高通量的化合物的检测。核糖核苷酸还原酶(Ribonucleotide reductase, RNR)是合成脱氧核糖核苷三磷酸的限速酶，正常生长条件下，细胞中几乎检测不到RNR3的表达，当DNA损伤或是合成阻断时可诱导大量RNR3表达[2-3]。……