曲连悦，蔡 爽，姜明燕

(中国医科大学 附属第一医院 药学部，辽宁 沈阳 110001)

人重组蛋白胸腺素B10促进卵巢癌细胞系SKOV3凋亡

曲连悦，蔡 爽，姜明燕*

(中国医科大学 附属第一医院 药学部，辽宁 沈阳 110001)

β族胸腺素由于具有维持细胞骨架的动态平衡，促进血管生成、伤口愈合、心肌修复等多种生物学功能,并与肿瘤发生、转移具有密切关系而倍受关注。本文研究对象胸腺素B10(thymosinβ 10，Tβ10) 定位于胞内，大量文献证实Tβ10与肿瘤的发生发展有关[1-2]，但在不同类型的肿瘤中它的功能还存在争议，Tβ10在肿瘤细胞凋亡中所起的作用也鲜有报道。本实验将在卵巢癌细胞系SKOV3中探索Tβ10对其凋亡的影响及其分子机制。

1 材料与方法

1.1 材料:重组人Tβ10蛋白(Abcam公司)；流式双染试剂盒(BD公司)；caspase-3活性检测试剂盒(Haimen公司)；Cell Counting Kit-8® solution(CCK-8)试剂盒(日本同仁公司)；Annexin V-FITC/PI双染试剂盒(KeyGEN公司)；BAX、BCL-2 抗体(Santa Cruz公司)；RNA提取及Realtime PCR(Takara公司)。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养：培养SKOV3细胞使用DMEM 培养基含10%灭活小牛血清。37 ℃,5% CO2的条件下培养，每2天换1次液，并用0.25%的胰蛋白酶消化传代。

1.2.2 细胞活力检测：使用CCK-8 检测细胞的增殖能力。将处于对数增殖期的SKOV3细胞分成4组，其中1组为对照，加入等体积的PBS,另外3组分别加入0.5、1或2 g/L 3个浓度的Tβ10，24 h后按每孔4×103个/100 μL将各组分别接种于96孔培养板中，待其贴壁后每孔加入10 μL CCK-8 继续培养4 h。检测在450 nm 波长下测定各孔吸光度值，以不含细胞的等体积培养基作对照。

1.2.3 细胞凋亡检测:使用Annexin V-FITC/PI双染试剂盒进行细胞凋亡检测。细胞接种于6孔板内，每孔3 mL大约4×105个，实验组加入Tβ10 1 g/L，对照组加入PBS，24 h后收集细胞。流式细胞仪计数1万个细胞，细胞凋亡百分比用CellQuest analysis 软件计算。……