李猷+尹蕾+唐凯悦+律凤霞

摘要：以番茄叶片为外植体，含有烟草花叶病毒外壳蛋白（TMV-rep）基因的工程农杆菌LBA4404为外源基因转化的双元载体，通过农杆菌叶盘法将外源基因转入番茄，转化前将番茄叶片进行不同时间预培养，研究外植体预培养时间对外源基因转化率的影响。结果表明，最适宜的预培养时间为32～48 h，番茄外植体转化率均达到70%以上。

关键词：番茄；烟草花叶病毒；预培养时间；转化率

中图分类号：S641.2 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2014）17-4208-03

Effects of Pre-culture Time of Explants on the Exogenous Gene

Transformation in Tomato

LI You，YIN Lei，TANG Kai-yue，L？譈 Feng-xia

（Department of Biology， Mudanjiang Normal College， Mudanjiang 157011， Heilongjiang， China）

Abstract： The leaves of tomato were used as explants and the Agrobacterium （LBA4404） was used as binary vector containing tobacco mosaic virus replicase gene（TMV-rep）， the pre-culture time before transformation was optimized. The results showed that the pre-culture time had significant effects on transgenic rate. The optimal pre-culture time was 32～48 hours，with transformation rate of more than 70%.

Key words：tomato；tobacco mosaic virus；pre-culture time； transgenic rate

番茄是世界上最主要的蔬菜作物之一，营养丰富，味道鲜美。随着番茄种植区域和面积的不断扩大，病虫害成为影响番茄产量和品质的重要因素，造成的损失可达50%～100%[1]。病毒病是番茄的主要病害之一，每年造成番茄不同程度减产。危害番茄的病毒主要有烟草花叶病毒（TMV）、黄瓜花叶病毒（CMV）、黄瓜卷叶病毒（TYL2CV）、苜蓿花叶病毒（AIMV）和番茄斑萎病毒（TSWV）等[2]。可以通过常规杂交或回交等手段，获得综合性状表现优良且抗病的番茄品种，但常规育种手段在提高番茄抗病性方面进展速度有限，而以病毒来源的基因介导抗性所取得的成就较大。目前，番茄抗病毒病基因工程培育出了能稳定遗传的抗病毒植株，除外壳蛋白基因外，在番茄上主要采用卫星RNA基因、反义RNA基因等方法获得抗病毒番茄。通过RNA干扰技术获得的抗病毒转基因植物符合人们对生物安全性的高要求，但这种技术在番茄上的应用不多[3-5]。尤其是RNA干扰外源基因载体对番茄转化时，转化率成为限制转化成功的主要因素之一[3-5]。……