朱 滢 孙晓萌 王 云 巩尧瑶 林 琳

南京医科大学第一附属医院消化科(210029)

结肠动力障碍是糖尿病(diabetes mellitus，DM)常见慢性并发症之一，约75%的DM患者伴有胃肠动力障碍［1-2］。近年发现，糖基化终末产物(advanced glycation end products，AGEs)在DM患者体内显著升高［3］。目前对AGEs在DM并发症中作用的研究主要集中于DM肾病和心血管病，而对DM胃肠动力障碍方面的研究较少［4-5］。平滑肌是维持胃肠道运动的基础，磷酸化肌球蛋白轻链(phosphorylated myosin light chain，p-MLC)是平滑肌收缩的重要因素［6-7］。研究［8］发现，MLC 信号通路异常在DM血管病变中发挥重要作用，但对DM胃肠动力障碍的作用尚未明确。本文通过探讨DM大鼠结肠组织中MLC磷酸化与结肠动力的关系，以及AGEs对MLC磷酸化的影响，旨在为阐明DM肠道动力障碍提供依据。

材料与方法

一、实验动物和主要试剂

清洁级Sprague-Dawley雄性大鼠16只，5周龄，体质量约150 g，由南京医科大学动物实验中心提供。链脲菌素、生物素-卵血清-HRP复合物、乙酰胆碱购自美国Sigma公司;p-MLC兔抗鼠多克隆抗体、总肌球蛋白轻链(t-MLC)兔抗鼠多克隆抗体购自美国Cell Signaling Technology公司;胎牛血清、DMEM培养液购自美国Gibco公司;AGEs购自美国Merck Millipore公司。

二、实验方法

1.DM动物模型建立:16只大鼠随机分为DM组和正常对照组，每组各8只，DM组参照 Wang等［9］的研究给予单次腹腔注射链脲菌素60 mg/kg建立DM大鼠模型，正常对照组单次腹腔注射等体积柠檬酸缓冲液。一周后检测大鼠尾静脉血糖水平，血糖＞16.7 mmol/L提示造模成功。

2.结肠组织标本采集:参考Wang等［9］的研究于造模8周后以颈椎脱臼法处死DM组和正常对照组大鼠，取大鼠远端结肠组织于4%多聚甲醛固定或－80℃冰箱保存待测。……