赵会君 孔 炫 房静远

上海交通大学医学院附属仁济医院消化内科 上海市消化疾病研究所(200001)

结直肠癌是消化系统常见恶性肿瘤，病死率在恶性肿瘤中居第四位［1］。动物脂肪摄入量增加是促进结直肠癌形成的重要因素［2］。动物脂肪摄入量增加可促进胆汁酸分泌，导致体内次级胆汁酸含量增加。脱氧胆酸(deoxycholic acid，DCA)是参与肠肝循环的一种次级胆汁酸，研究［3］显示结直肠癌患者粪便中的DCA含量明显高于健康人，且DCA含量升高的结直肠癌患者肿瘤复发风险显著增加。Yui等［4］的研究显示，DCA可诱导结肠上皮细胞DNA损伤、线粒体破坏，促进结肠上皮细胞凋亡，并可引起细胞基因组不稳定性，导致基因突变增加，进而促进结肠癌发生。Da Silva等［5］的研究发现，DCA在体外可通过激活蛋白激酶B和p38，促进ERK1/2磷酸化，诱导结肠癌细胞增殖。DCA是生理状态下体内长期存在的代谢分子，然而目前研究多为以高浓度DCA短时间刺激细胞，采用长时间慢性刺激的研究甚少。本研究以DCA长时间刺激人结肠癌细胞株HCT116，探讨DCA在结肠癌细胞迁移和侵袭中的作用及其机制，以期为结直肠癌的防治提供理论依据。

材料与方法

一、细胞株和主要试剂

人结肠癌细胞株HCT116购自American Type Culture Collection(ATCC)，培养于含10%胎牛血清的McCoy’s 5A培养基中(37℃，5%CO2)。DCA、DMSO购自Sigma公司，CCK-8试剂盒购自东仁化学科技(上海)有限公司，Matrigel基质胶购自BD公司，Transwell小室购自Millipore公司，Bradford蛋白定量试剂盒购自碧云天生物技术研究所，兔抗人上皮型钙黏蛋白(E-cadherin，E-cad)抗体、鼠抗人神经型钙黏蛋白(N-cadherin，N-cad)抗体、兔抗人维生素D受体(VDR)抗体购自Abcam公司，GAPDH抗体、HRP标记的羊抗兔二抗、兔抗鼠二抗购自上海康成生物工程有限公司，ECL试剂盒购自Pierce公司。……