李东，黄光龙，曾成林，王亚瑞

（广东省化州市人民医院，广东 化州 525100 E－mail：254599846＠qq.com）

瘦素（leptin）是白色脂肪组织分泌的调节能量代谢的重要激素，通过中枢和外周作用调节机体脂肪和体重。此外，也可以作用于机体广泛分布的瘦素受体，参与调节机体免疫、造血功能、器官纤维化、骨骼代谢、肿瘤和心血管疾病等病理和生理过程［1］。肝星状细胞（hepatic stellate cell，HSC）的活化为肝纤维化的中心环节，肥胖和糖尿病患者常合并高瘦素血症，而且在肝纤维化动物模型肝脏局部组织瘦素表达也很高，已有一些研究发现瘦素可能直接作用于HSC而促进其激活［2］，但是其中的分子机制尚未明确。因此，本研究通过体外瘦素处理人肝星状细胞（模拟机体高瘦素血症），观察研究瘦素对人肝星状细胞的活化及其作用机制，为临床防治肝纤维化提供新的实验依据。

1 材料和方法

1.1 材料 瘦素购自 Prospec公司（Israel），抗 TGF－β1、SREBP－1c、Ⅰ型胶原、α－SMA抗体购自Santa Cruz Biotechnology公司，DMEM培养基以及特级胎牛血清（FBS）购自Gibco BRL（USA）。

1.2 细胞培养 HSC细胞由中山大学实验动物中心提供。在37℃、5%CO2的条件下，培养于含有10%胎牛血清的DMEM培养基中。

1.3 Western blot测定蛋白的表达 HSCs细胞接种于6cm培养皿中，各实验组给予不同的处理因素后，用预冷的PBS洗两次，加入细胞裂解液，4℃静置30min，12 000r／min离心10 min，取上清，BCA法进行蛋白定量。总蛋白经SDSPAGE分离后，转移到PVDF膜上。用5%脱脂奶粉封闭1.5h，随后加入抗TGF－β1、SREBP－1c、Ⅰ型胶原和α－SMA抗体 （1∶1 000），4℃过夜，用TBST洗3次，10分／次。将PVDF膜用发光试剂ECL显色，暗室曝光到X线片上，凝胶成像系统扫描分析结果。

2 结果

2.1 瘦素可以诱导HSCs细胞a－SMA和Ⅰ型胶原表达上调 为了探讨高瘦素血症对HSCs细胞的影响，体外用重组瘦素处理HSCs细胞48h后，与正常对照组比较，α－SMA和Ⅰ型胶原表达显著升高。……