杨建辉 吕建国 聂会勇 申晓东

(西安交通大学医学院第一附属医院康复中心，陕西 西安 710061)

软骨细胞凋亡在骨关节炎(OA)的发生、发展中发挥重要作用〔1〕。细胞凋亡增加，必然导致软骨基质的降解，基质合成减少，且对促进基质合成增加的治疗措施效果不佳〔2〕。白藜芦醇是一种非黄酮类多酚化合物，具有抗衰老、抗氧化、抗炎、抗肿瘤活性、调控细胞凋亡、雌激素调节及免疫调节等多种生物学活性〔3，4〕。本实验以IL-1β诱导的软骨细胞凋亡模拟体内炎性环境下软骨细胞变化，研究白藜芦醇对软骨细胞凋亡及增殖能力的影响。

1 材料与方法

1.1实验试剂 重组人白细胞介素(rhIL)-1β(Pepro-Tech)；胰蛋白酶，Ⅱ型胶原酶，DMEN/F12培养基，胎牛血清(Gibco)；Hoechst 33342，罗丹明-123(Rhodamine-123)(Sigma)；TUNEL试剂盒，SABC试剂盒(武汉博士德公司)；MTT，DMSO(Amresco)；RNA酶抑制剂(RNase，TAKaRa)；白藜芦醇溶液由西安交通大学医学院实验中心提供。

1.2含药血清和正常兔血清的制备 将白藜芦醇按体表面积折算动物的等效剂量〔5〕，再用生理盐水配成8 ml溶液给新西兰大白兔灌胃，正常兔血清则以生理盐水8 ml灌胃。连续2次灌胃，中间间隔2 h，在末次灌胃的3 h后，乙醚和氯胺酮复合麻醉下腹主动脉采血，4℃冰箱过夜后，离心2 500 r/min×25 min，抽取血清，56℃、30 min灭活，经0.45 μm滤膜抽滤除菌、分装，-20℃保存备用。

1.3软骨细胞的分离与培养 无菌条件下取1个月龄新西兰大耳白兔肩、膝关节软骨，将软骨块用D-Hank液漂洗，剪碎至1 mm3大小，加入0.2%Ⅱ型胶原酶，置振荡器上，37℃震荡消化1 h，然后再加入0.25%胰蛋白酶作用30 min后，将游离出的带有酶溶液的软骨细胞用吸管吸出，120目尼龙网筛过滤，获取软骨细胞，细胞活力分析仪检测细胞活力>95%。将……