郭威早 纪 红 严之红 刘会臣

(航天中心医院高干二科，北京 100049)

根据流行病学调研，肺癌是我国男性中发病率最高的恶性肿瘤，在女性中的发病率也高居第二位〔1〕。紫杉醇是由红豆杉科植物中提取的化合物，1992年获得美国食品药品管理局(FDA)批准用于肿瘤治疗〔2〕，在非小细胞肺癌治疗中的应用也在逐步推广〔3〕。然而，由于抗药性的不断出现，如何在紫杉醇的抗肿瘤治疗中实现增敏增效业已成为迫切的临床需求〔4〕。在已经试验的临床化疗策略中，采用表皮生长因子(EGFR)抑制剂与紫杉醇配合的疗法展示了良好的临床运用前景〔5〕。微小RNA (miRNA)是基因调控的核心途径之一，在细胞的生长、发育、分化以及对环境的适应中发挥着非常重要的作用〔6，7〕，通过选择特定的miRNA实现对EGFR的特异性抑制，将抗EGFR的miRNA和紫杉醇联合运用，可以发挥化药给药途径简便而生物药特异性高等优势。本研究观察EGFR特异性调控miRNA与紫杉醇对肺癌细胞的协同抑制效应。

1 材料与方法

1.1肺癌细胞株体外培养 人非小细胞肺癌细胞株A549和HCC827来源于美国ATCC公司，A549的培养基为F-12K，HCC827的培养基为RPMI-1640，使用前均加入10%胎牛血清。培养基及胎牛血清购自Invitrogen公司。培养条件为Forma-3110型二氧化碳温箱，5% CO2,37℃。初期培养采用200 ml培养瓶，结束后采用0.25% 胰蛋白酶合并0.53 mmol/L EDTA溶液处理10 min，细胞脱壁收集后以10 ml相应无血清培养基清洗3遍，转入12孔板进行分盘培养，每孔加入细胞数约5×104, 加入含血清培养基1 ml。

1.2紫杉醇处理 紫杉醇(Sigma-Aldrich公司)以二甲基亚砜(DMSO)制成1 μmol/L储存液，以相应无血清培养基进行梯度稀释，处理细胞的终浓度分别为0.01、0.1、1、2.5、5、10、15、30、50、100 nmol/L，处理时间为72 h。……