齐 昕 徐晓光 蒋颖超

(吉化集团公司总医院,吉林 吉林 132001)

许多研究显示，山梨醇(Sorbitol)作为一种糖醇可以诱导多种癌症细胞凋亡〔1，2〕。在肺癌细胞中Sorbitol可以诱导细胞死亡，然而，Sorbitol也可以增加酪蛋白激酶(CK)2的表达，因此被认为是Sorbitol应用的弊端。 CK2是一种致癌基因，在包括肺癌在内的多种人类肿瘤中普遍上调。研究发现CK2可以参与调控细胞生长、增殖和凋亡〔3〕，通过激活核转录因子(NF)-κB促进癌症细胞存活〔4,5〕，保护癌症细胞免受药物诱导的凋亡〔6〕。研究显示，通过siRNA技术或抑制剂抑制CK2的活性可以引起癌症细胞凋亡〔7～11〕。因此靶向CK2可能会为癌症治疗或者联合治疗提供一种可能性。本文分析CK2抑制剂(TBB)与Sorbitol联合应用在肿瘤抑制中的效应及其根本机制。

1 材料与方法

1.1主要试剂与仪器 山梨醇(Sorbitol)，TBB，四甲基偶氮唑蓝(MTT)购自Sigma公司(美国)，胎牛血清和DMEM培养基购自Gibco公司(美国)。

1.2细胞株与细胞培养 人肺癌A549细胞购自美国ATCC公司，细胞于含10%胎牛血清DMEM培养基中，当A549细胞生长至对数生长期时进行细胞传代和实验。

1.3MTT法检测细胞活性 A549细胞以1×104/ml密度接种于96孔细胞培养板中，每孔加100 μl，待细胞隔夜培养完全贴壁后给予不同的药物，继续培养24 h后，加入MTT溶液后继续培养4 h，分为对照组(Control)，Sorbitol 1 h组，Sorbitol 2 h组，Sorbitol 3 h组。结束后用加样器弃除上清，每孔加入150 μl二甲基亚砜(DMSO)，振荡器上混匀10 min，用酶标仪于490 nm波长处测定吸光度(A)值。按下面公式计算细胞存活率。细胞存活率 (%) =〔A实验孔-A空白孔/(A对照孔-A空白孔)〕×100%

1.4Western印迹检测细胞蛋白表达 将各组药物处理过的A549细胞，加入细胞裂解液(RIPA)，用细胞刮将贴壁细胞刮下，收集到1.5 ml离心管中，裂解20 min后，离心收集上清，测蛋白浓度，加入上样缓冲液煮沸变性后进行丙烯酰胺凝胶电泳。……