董莹莹 李 威

(辽宁省妇幼保健院妇产科，辽宁 沈阳 110005)

磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)是一种胞内磷脂酰肌醇激酶，它介导的下游多种信号转导通路的激活调节细胞的多种生理过程，包括细胞的增生、分化、凋亡。研究发现，PI3K/Akt参与了细胞的正常生理活性的调节，且只在细胞恶性转化时表达是增加的，其过度表达对肿瘤的发生发展起着至关重要的作用〔1～3〕，但是，在宫颈癌的病理过程中，PI3K/Akt能否通过调节Bcl-2的表达参与肿瘤细胞的凋亡过程尚不清楚，需进一步研究。本研究采用Western 印迹和RT-PCR方法，检测经不同浓度的PI3K抑制剂(LY-294002)处理的人宫颈癌细胞株的Bcl-2的表达变化，探讨PI3K在宫颈癌的病理作用机制。

1 材料与方法

1.1材料 人宫颈癌Hela细胞购自中国科学院细胞所；RPMI-1640培养基购自Gibco BRL公司；PI3K抑制剂LY294002购自碧云天生物技术研究所，分子量307.3；鼠抗人单克隆Bcl-2购于美国Santa Cruz公司。

1.2细胞培养 人宫颈癌Hela细胞置于37 ℃，饱和湿度，5%CO2恒温培养箱中常规消化传代。以含10%小牛血清、100 U/ml青霉素和100 U/ml链霉素的培养液RPMI-1640培养，根据细胞生长状态每2～3 d传代1次。取生长状态稳定，呈对数生长期细胞用于实验。

1.3实验分组 实验使用细胞均为接种24 h后处于对数生长期细胞，分为对照组和LY294002干预组，干预组再细分为4个亚组，分别以终浓度为 5、10、20、40 μmol/L 的PI3K抑制剂LY294002处理人宫颈癌Hela细胞，作用48 h。

1.4Western印迹方法检测各实验组Bcl-2蛋白的表达 用蛋白裂解液RIPA(50 mmol/L Tris-base、1.0 mmol/L EDTA、150 mmol/NaCl、 0.1%SDS、1%TritonX-100、1% Sodium deoxycholate)及蛋白酶抑制剂(USA)提取细胞蛋白，用考马斯亮蓝G250结合法，测定蛋白浓度，计算加样量。加入样品缓冲液，沸水浴中加热5 min使蛋白质变性，制备12%分离胶，4%浓缩胶，电泳，5%脱脂奶粉TTBS缓冲液4 ℃过夜。……