张 科 邰智慧 李淑英 杜海军 李劲涛 朱丽华 赵 莹 张云茹 周 玲 曾 毅

(河北联合大学继续教育学院，河北 唐山 063000)

EB病毒(EBV)是DNA肿瘤病毒，与多种人类恶性肿瘤有关。近年来研究表明EBV 感染与胃癌的发生有关〔1，2〕，一般认为超过80%的淋巴上皮瘤样胃癌都有EBV感染,而不同胃癌中,EBV感染表达的基因不同〔3，4〕。本研究以EBV感染体外培养的不同分化程度的胃癌细胞系，分析EBV感染细胞中EBV编码核抗原EBNA1、EBNA2、潜伏感染膜蛋白LMP1、LMP2A、裂解感染早期基因BARF1、晚期基因BLLF1及BcLF1的表达状况，探讨EBV对不同分化程度胃癌细胞的易感性及EBV相关胃癌发生可能的机制。

1 材料与方法

1.1材料 B95-8细胞、低分化前胃癌细胞株(BGC823)、低分化胃癌细胞株(MKN45)及高分化胃腺癌细胞(MKN28)本室保存。RNA提取试剂盒、逆转录PCR试剂盒、RPMI1640细胞培养液、DMEM细胞培养液及小牛血清及2倍Power Taq PCR Master Mix均购于北京百泰克生物公司。

1.2方法

1.2.1细胞培养 用RPMI1640培养液(添加10%灭活的小牛血清，100 U/ml青霉素和100 U/ml链霉素)常规培养B95-8细胞；用DMEM培养液(添加10%灭活的小牛血清，100 U/ml青霉素和100 U/ml链霉素)常规培养BGC823、MKN45及MKN28细胞，每2～3天换液1次。

1.2.2EBV制备 用携带EBV的B95-8细胞系制备EBV：用含10%小牛血清的RPMI1640培养液调B95-8细胞浓度为5×105/ml，置33℃培养11 d，取培养上清经0.45 μm滤器过滤后，10 000 r/min，4℃离心2 h，弃去90%的上清液，制备成10倍浓缩的EBV悬液，分装贮存于-80℃备用。

1.2.3引物设计与合成 根据GenBank提供的EBV基因组序列，设计扩增引物，引物设计后，委托上海生工生物技术有限公司合成。见表1。

1.2.4EBV感染 实验所用BGC823、MKN45及MKN28细胞株为EBV阴性。取生长状态良好的3种细胞株，调整细胞浓度为5×103个细胞/ml，当50% 细胞发生汇合时，加入EBV悬液(使EBV与细胞培养液终浓度比为1∶10)继续培养4 d，然后加入无EBV的细胞培养液传代，每2天换液1次。……