何展文 李栋方 刘木金 孟 哲 李平甘 罗向阳 梁立阳 李文益

(中山大学孙逸仙纪念医院，广东 广州 510120)

炎症性脱髓鞘疾病是一种基因、病毒感染、环境等多因素相互作用引起的神经系统自身免疫性疾病，外源的病毒感染后可激活淋巴细胞引起特异性免疫应答，病毒的抗原决定簇与髓鞘抗原相似，导致交叉免疫反应，从而攻击自身的髓鞘组织。目前应用于炎症性脱髓鞘疾病的自身免疫性脑脊髓炎(EAE)动物模型主要以髓鞘碱性蛋白(MBP)、豚鼠脑脊髓组织匀浆(BSCH)、蛋白脂质蛋白(PLP)或其多肽片段、髓鞘素(myelin)等作为免疫抗原。研究骨髓间充质干细胞(BMSCs)对EAE特异性致敏抗原刺激后淋巴细胞增殖的免疫调节作用，国内外文献报道并不多见〔1〕。本实验拟了解体外异种大鼠BMSCs对MBP68-86抗原刺激后淋巴细胞免疫调节作用，为BMSCs对EAE的免疫调节治疗提供依据。

1 材料与方法

1.1主要实验材料 胎牛血清、DMEM培养基购自美国HyClone公司，胰蛋白酶购置上海吉泰科技有限公司。FITC小鼠IgG1购自BD pharmingen公司；小鼠抗大鼠CD44、PE抗大鼠CD3、PE小鼠IgG1、PE抗大鼠CD4、PE抗大鼠CD8、PE抗小鼠或大鼠CD25购自Serotec公司；FITC抗大鼠CD90、PE抗大鼠CD106、PE抗大鼠CD45、PE小鼠IgG2a、PE抗大鼠CD11b/c、PE Armenlan Hamster和PE抗小鼠或大鼠CD29购自 Biolegend公司；CD34 PE购自Santa Cruz Biotechnology公司。ConA购自 sigma公司，MBP68-86(bs-0380p)购自北京博奥森生物技术有限公司。完全佐剂购自广州捷倍斯生物科技有限公司。绿色荧光染料羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)购自美国Molecular Probes公司。IFN-γ、TGF-β1和 IL-10ELISA试剂盒购自上海麦约尔生物科技有限公司。

1.2实验动物 健康Wistar大鼠，180～220 g左右，购自广东省南方医科大学动物实验中心，合格证号：广东省实验动物检测所合格证2006-0015号。……