逄 利 王少坤 凡文博 张 楠 侯 玥 徐大海 吴 扬

(吉林大学第一医院急诊科，吉林 长春 130021)

百草枯中毒与氧自由基损伤、过度炎症反应、钙超载、酶失衡、细胞凋亡、DNA损伤及基因表达异常等有关〔1〕。蛹虫草小分子肽有抗肿瘤、增强免疫力、抗氧化损伤等特点。本文旨在观察蛹虫草小分子肽对百草枯所致人胚肺成纤维细胞MRC-5过氧化的保护作用。

1 资料与方法

1.1实验材料及主要试剂 胎牛血清，人胚肺成纤维细胞MRC-5，DMEM培养基，丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)试剂盒。

1.2虫草小分子肽的提取 将购买的蛹虫草制成小分子肽，采用高效凝胶过滤色谱法(HPGFC)测定，小分子肽峰值分子量为300～700 D。

1.3MRC-5细胞的培养及分组 MRC-5细胞用0.25%胰酶消化后传代，计数后以106个/ml的密度悬浮于DMEM培养基中，置于37℃、5%CO2条件下培养，连续培养4代后进行实验。将细胞随机分为5组：①对照组：MRC-5细胞常规培养；②模型组：加入终浓度为1 mmol/L的百草枯；③实验组1：加入终浓度为1 mmol/L的百草枯+5 mg/ml的蛹虫草小分子肽；④实验组2：加入终浓度为1 mmol/L的百草枯+10 mg/ml的蛹虫草小分子肽；⑤实验组3：加入终浓度为1 mmol/L的百草枯+20 mg/ml的蛹虫草小分子肽。

1.4MTT法测细胞存活率 细胞存活率用MTT 法测定〔2〕。

1.5检测方法 采用氯化硝基氮蓝四唑光还原法(NBT法)测定SOD活性，按照试剂盒说明操作，在560 nm处测定OD值。GSH-Px用DTNB显色法测定〔3〕。MDA含量用硫代巴比妥酸(TBARS)方法测定〔4〕。

2 结 果

2.1蛹虫草小分子肽对MRC-5存活率的作用 与对照组〔(46.13±7.56)%〕相比，百草枯可显著诱导MRC-5细胞的损伤，模型组细胞存活率仅为(17.06±3.43)%。随着蛹虫草小分子肽浓度增加，细胞的存活率也逐渐增加。……