周小莉 苟晓燕 李荣亨

(重庆市中医院风湿病科，重庆 400021)

研究发现一氧化氮(NO)参与介导的软骨细胞凋亡在关节软骨退行性改变过程中起着重要作用〔1，2〕。复元胶囊是临床上长期用于治疗骨关节炎(OA)疗效有明显的中药复方实验制剂，本实验观察复元胶囊对OA模型大鼠软骨细胞凋亡、关节液中NO及软骨细胞核增殖抗原(PCNA)mRNA表达的影响。

1 材料与方法

1.1实验药物 复元胶囊由人参、淫羊藿、鹿茸、黄芪、川芎、当归、枸杞子等组成，委托重庆希尔安药业有限责任公司制成胶囊，仅供实验使用(医院制剂批号：[2005]12号B-55)；壮骨关节丸，由深圳三九医药业股份有限公司生产，批号：Z44023377。

1.2实验动物 雄性成年SD大鼠48只200～250 g，由重庆医科大学实验动物中心提供，实验动物生产许可证号：SYXK(渝)2002007。

1.3实验试剂 TUNEL试剂盒购自美国Roche公司；硝酸还原酶法NO检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所；蛋白酶K购自美国Sigma公司；DAB显色试剂盒购自北京金桥中衫生物技术有限责任公司；RNA提取试剂Trizol购自Invitrogen公司；两步法RT-PCR试剂盒购自TaKaRa公司；PCNA及内参GAPDH引物购自上海Sangon公司引物序列为：DL2000型DNA Maker购自TaKaRa公司；DEPC水购自sigma公司；琼脂糖粉购自北京金桥中衫生物技术有限责任公司；GoldViewTM核酸染料购自北京赛百盛公司。

1.4实验仪器 RD2000型X线机：美国长青公司；BX-50行生物显微镜：日本Olympus公司；HITACHI-7500型透射电镜：日本HITACHI公司；BX40型光学显微镜：日本OLYMPUS公司；ELX-800型酶标仪： 德国Eppendorf公司；PCR 仪：德国EPPENDORF公司；Bio-RAD电泳仪及凝胶成像仪：美国BioRad公司。PCNA(290 bp)正向：5' TTGGAATCCCAGAACAGG3'；反向5'AGACAGTGGAGTGGCTTT3'；GAPDH(492 bp)正向：5'ATCACTGCCACCCAGAAGACT3'；反向5'CATGCCAGAGGTCGGTTCGTTTT3'。

1.5方法

1.5.1动物分组 48只SD大鼠随机分成四组，分别为正常组、模型组、壮骨关节丸组以及复元胶囊组，每组12只。……