闫振坤 王立波 宋玉梅 刘晓阳 齐 玲

(吉林大学中日联谊医院，吉林 长春 130033)

肿瘤生物学研究发现，脑肿瘤中存在的肿瘤干细胞(TSCs)是肿瘤发生及耐药的根源〔1～3〕。肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)作为临床肿瘤新药已进入Ⅱ期研究阶段，顺铂(CIS)是常规化疗药物之一。本文拟研究TRAIL和CIS这两种药物对人脑胶质母细胞瘤SC326神经球细胞生长的作用。

1 材料与方法

1.1细胞和主要试剂 SC326神经球(吉林医药学院干细胞实验室提供)。CIS、MTS试剂盒(美国Sigma公司)；神经培养基、B27添加物(美国Gibco公司)，人碱性成纤维生长因子(bFGF)和人表皮生长因子(EGF)(英国Pepro Tech公司)。

1.2神经球培养〔4，5〕将神经球细胞接种于干细胞培养液(SCM，包括神经培养基、B27添加物、20 μg/L EGF和bFGF)中进行培养，每3～5 d离心换液一次，按1∶2比例传代。

1.3TRAIL和顺铂对神经球细胞生长的作用 神经球细胞机械分离成单细胞悬液，以每孔100 μl SCM含5 000个细胞接种于96孔板中，置入37℃、5% CO2培养箱中培养。实验设为空白对照组、TRAIL组(300 mg/L)、CIS组(10 mg/L)和联合用药组(TRAIL 300 mg/L+CIS 10 mg/L)，每组5个复孔，作用3 h后，每孔加入MTS 20 μl继续孵育2 h，加入10%十二烷基硫酸钠(SDS)溶液终止反应。酶标仪490 nm处测定各孔光吸收值。计算细胞死亡率。倒置显微镜下观察SC326神经球形成情况。

2 结 果

2.1药物作用后神经球细胞的死亡率 TRAIL和CIS组SC326神经球细胞死亡率分别是(24.43±2.06)%和(22.02±2.58)%；两者联合作用后明显增加到(52.32±4.35)%。

2.2药物作用后神经球形成观察 见图1。TRAIL和顺铂均可以抑制神经球的形成，两者联合抑制作用更明显。

空白对照组 联合用药组

3 讨 论

脑肿瘤发生在颅内，以恶性居多，其中以胶质母细胞瘤恶性度最高，现今无有效的治疗方式。……