齐亚灵 孟德欣 杨广民 周晓红 李艳君 杨 宇 谭 岩

(佳木斯大学，黑龙江 佳木斯 154002)

肿瘤的形成是由于各种致癌因素引起DNA损伤，从而激活原癌基因和(或)灭活抑癌基因；或者凋亡调控基因和(或)DNA修复基因发生改变，进而引起基因表达异常。基因疫苗是将编码抗原的基因片段克隆到真核表达质粒，将该质粒免疫动物，致使编码抗原的基因片段在宿主体内表达，刺激机体产生免疫应答，诱导肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤肿瘤。本文观察pcIL-18-MAGE-1共表达基因疫苗免疫后小鼠脾细胞诱导的肿瘤特异性 CTL 对肝癌细胞株SMMC-7721、Hepal-6的杀伤作用，探究pcIL-18-MAGE-1共表达基因疫苗抗肿瘤作用。

1 材料和方法

1.1细胞株、质粒、实验动物 质粒 pcDNA3、pcIL-18-pcMAGE-1、肝癌细胞株SMMC-7721和Hepal-6为吉林省人民医院肿瘤生物治疗中心提供。清洁级雌性C57BL/6J小鼠(中国医学科学院实验动物研究所)，体重(20±2)g，自由食水，无菌动物室饲养。

1.2主要试剂和仪器 胎牛血清、IMDM 细胞培养液、淋巴细胞分离液、MTT、DMSO、3%氢氧化铝(武汉博士德公司)。FITC与PE标记的羊抗鼠CD4+、CD8+单抗、FITC标记的羊抗鼠IgG单抗(美国Immunotech公司)。流式细胞仪(FCM)(美国BD公司)、HF240二氧化碳培养箱(上海斯高勒生物科技有限公司)。

1.3实验分组及免疫方法 将30只C57BL/6J小鼠随机分为3组各10只。疫苗免疫组肌注100 μg pcIL-18-pcMAGE-1(0.4 ml 3%氢氧化铝胶)；空白对照组肌注等量生理盐水；阴性对照组肌注等量空质粒pcDNA3。注射部位：小鼠大腿内侧肌群。每隔10 d注射1次，共3次。末次注射7 d后，断头处死小鼠，将取出的脾脏浸入含 10%胎牛血清的IMDM细胞培养液中研磨，用200目滤网过滤，收集脾细胞悬液于玻璃试管中备用。……