张国强 李 玲 程 毅 高顺强

(河北医科大学第四医院皮肤科，河北 石家庄 050011)

毛乳头细胞是位于毛囊基底部的一群真皮源性细胞，其显著的生物学特性为体内外表现为凝集性的生长方式及体内外具有诱导毛囊形成的能力。研究表明毛乳头细胞分泌的多种生长因子如胰岛素样生长因子1(IGF-1)，成纤维细胞生长因子7 (FGF7)及干细胞因子(SCF)等均可以促进体外培养的人毛乳头细胞的增殖〔1，2〕。血管内皮生长因子(VEGF)即血管渗透因子或血管调理素。它是毛乳头自分泌的一种生长因子并可作用于毛乳头细胞。VEGF的生物学功能一是增加血管的通透性，二是刺激血管生成〔3，4〕。本实验旨在观察不同代次毛乳头细胞表达VEGF的情况，并通过人工干预的方法加入VEGF观察其对毛乳头细胞生长曲线的影响。

1 材料和方法

1.1设计 细胞对比观察实验。时间及地点：实验于2009年5月至2010年12月在河北医科大学第四医院科研中心及河北医科大学第一医院耳鼻喉科实验室完成。

1.2材料 头皮取自2009～2010年河北医科大学第四医院神经外科手术患者，年龄20～40岁，无系统性疾病，均取得患者同意，离体6 h进行实验。

1.3试剂 分离酶、胶原酶D、L-谷氨酰胺、四甲基偶氮唑盐(MTT)、二甲基亚砜购于美国Sigma公司，鼠抗人α-平滑肌肌动蛋白单克隆抗体购于美国Neomarker公司，胎牛血清购于杭州四季青生物材料有限公司，重组人VEGF、DMEM培养基购于美国Gibco公司，VEGF单克隆抗体购于北京中杉金桥生物有限公司。

1.4毛乳头细胞的分离培养 人毛乳头细胞采用两步酶消化分离法分离〔5〕，得到纯化的人毛乳头细胞加入含体积分数10%胎牛血清的DMEM培养基混匀后，以每培养瓶30～50个毛乳头的密度接种。……