邓守恒 蔡晓军 潘东风 李 芳 李林均 陈 萍

(湖北医药学院附属人民医院肿瘤中心，湖北 十堰 442000)

白血病的发病年龄高峰为50～69岁，已成为当今威胁老年人身心健康的重大疾病之一〔1〕。三氧化二砷(As2O3)可用于治疗白血病，最新的研究又证实它能恢复部分耐药的肿瘤细胞对化疗药物的敏感性〔2,3〕。硒和砷在化学周期表中属同族，硒化壳聚糖〔4〕是将壳聚糖与亚硒酸在酸性条件下，以混合金属离子为催化剂，通过拼合原理制备成的有机硒，具有高效低毒的特性。前期的研究结果表明，硒化壳聚糖可通过多条途径对体外培养的多种白血病细胞K562、HL-60、NB4产生抑制增殖和诱导凋亡的作用〔5～7〕。由于砷剂尚具有逆转肿瘤耐药的作用，硒化壳聚糖理应也具有相同的功能。

1 材料与方法

1.1试药试剂与仪器 硒化壳聚糖(批号：100601-201016)由本院化学系合成，含硒量为0.8%；阿霉素(ADM)为浙江海正药业产品；碘化丙啶(PI)为Sigma产品；Western 印迹试剂盒为Promega产品； P-糖蛋白(P-gp)单抗及二抗为Santa Cruz产品； Trizol总RNA抽提试剂盒、RevertAidTMFirst strand cDNA synthesis kit 为Fermentas产品；MDR-1及β-actin引物由上海生工公司合成。Epics Elite ESP型流式细胞仪(Coulter公司)；AM-PLITRON Ⅱ型PCR扩增仪(Barnscread/Thermolyme公司。

1.2方法

1.2.1细胞培养 人慢性粒细胞白血病耐阿霉素细胞株K562/ADM购自中国医学科学院天津血液病研究所，培养于含10%胎牛血清、100 U/ml青霉素、100 U/ml链霉素和2 U/ml谷氨酰胺的RPMI 1640培养基内，在培养体系中加入终浓度为0.6 μg/ml阿霉素以维持其耐药性，于37 ℃、饱和湿度，5%CO2条件下培养，每隔3～4 d传代1次。

1.2.2流式细胞术检测细胞凋亡 收集指数生长期K562/ADM细胞以全培养液稀释成5×104个/ml单细胞悬液，接种于12孔板……